新型造血相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子EDAG作用機制的初步研究.pdf

1、紅系發(fā)育相關(guān)基因(erythoiddevelopassociatedgene，EDAG)是本實驗室自行分離克隆的一種特異表達于造血組織和細胞的新基因(中國專利申請?zhí)枺?1118268.8公開號：CN1388130A)。EDAG基因是從4月齡人胎肝組織與成年肝組織的差異表達基因EST庫中分離到的一種新基因片段，經(jīng)5’RACE獲得其全長為2166bp的cDNA。該基因定位于染色體9q22，編碼484個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，與小鼠Hemogen

2、及大鼠RP59基因同源。研究表明，EDAG高表達在胚胎組織和造血組織中，具有惡性轉(zhuǎn)化活性，與維持細胞的未分化狀態(tài)有關(guān)。高表達EDAG可使Ba/F3細胞存活能力增強，并可通過活化NF-κB上調(diào)c-myc、Bcl-xl、Bcl-2等增強細胞抗凋亡能力。轉(zhuǎn)基因小鼠的研究表明在小鼠造血細胞中過表達EDAG可導致造血干細胞增殖分化紊亂，突出表現(xiàn)在髓系造血增強，淋巴系造血抑制，并出現(xiàn)典型的髓系增生綜合征，表明EDAG是一種參與造血發(fā)育與分化調(diào)控的重

3、要基因。 目前EDAG調(diào)控細胞增殖、分化及凋亡的分子機制尚不明確。對EDAG蛋白的結(jié)構(gòu)進行生物信息學分析發(fā)現(xiàn)，在其N端有一個典型的coiled-coiled結(jié)構(gòu)域，此結(jié)構(gòu)域多存在于單聚體蛋白中，且高度保守，通常介導蛋白與蛋白之間的相互作用。這提示我們EDAG很可能是通過與其他重要蛋白的相互作用發(fā)揮功能。 本研究制備了EDAG及THAP11多克隆抗體，檢測了EDAG及THAP11的蛋白水平表達情況，發(fā)現(xiàn)EDAG與THA

4、P11的表達有相似性，并通過共定位及Co-IP驗證了二者的相互作用。初步探索THAP11對EDAG轉(zhuǎn)錄活性的影響，發(fā)現(xiàn)THAP11可增強EDAG的轉(zhuǎn)錄活性。通過熒光蛋白融合表達及Wesrtemblot分析可誘導表達EDAG穩(wěn)定細胞系中EDAG的分布兩種方法確定EDAG定位在細胞核中，為認識EDAG的作用機理提供思路。利用IP-MS方法檢測到EDAG的相互作用蛋白HSP70，在K562細胞中驗證二者的生理性相互作用，并初步探討了HSP70