未分化型甲狀腺癌CRABP--Ⅱ和FABP5的表達失衡及其與維甲酸耐藥性相關性研究.pdf

1、背景與目的：
　　甲狀腺癌是最常見的內分泌惡性腫瘤，在與內分泌有關的癌癥死亡患者中占絕大多數。大多數甲狀腺癌（乳頭狀和濾泡型）來自具有良好分化表型的濾泡性上皮，因此甲狀腺切除術具有良好的預后。然而，未分化型甲狀腺癌(Anaplastic thyroid cancer，ATC)盡管發(fā)病率低（約占總甲狀腺癌病例的2％），但其以很強的侵襲性迅速增長，導致ATC患者癌癥轉移不久就發(fā)生死亡。為了防止腫瘤復發(fā)，國內外眾多研究者已經采用了術后放

2、療、化療或其組合療法進行腫瘤治療。維甲酸(Retinoic acid，RA)具有很強的促分化能力，目前在臨床上常被用作誘導分化的藥物，用于增強ATC患者的放療敏感性。但根據臨床數據顯示，該治療方案的結果不完全相同?；赗A的再分化治療已經在臨床上應用，因此需要迫切謹慎地評估RA在ATC治療中的適用性。
　　RA已被用于通過促進放射性碘吸收的方式來克服甲狀腺癌的放射性碘抗性。然而，如上所述，治療后果是完全不同的。RA信號傳導可以通過

3、兩種經典途徑，分別由CRABP-Ⅱ作為癌抑制和FABP5作為促癌途徑轉導。然而，目前還沒有關于這兩個RA相關因子在未分化型甲狀腺癌體內外表達模式的研究報道。
　　因此，本研究旨在闡明導致ATC細胞對RA治療差異反應的潛在原因。通過組織微陣列的免疫組織化學染色對甲狀腺癌及正常甲狀腺組織中的CRABP-Ⅱ和FABP5表達水平進行分析，并通過多種實驗方法闡明其與三種ATC細胞的維甲酸耐藥性的關系。
　　材料與方法：
　　本研

4、究所用的人未分化型甲狀腺癌細胞系THJ-11T、THJ-16T和THJ-21T由大連醫(yī)科大學腫瘤干細胞研究院劉強教授提供。286例人甲狀腺癌組織標本由大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院臨床病理科和華南理工大學附屬第二醫(yī)院檢驗科友情提供，僅用于組織芯片的構建，不影響病理診斷。本研究采用細胞培養(yǎng)、MTT檢測、HE染色、IHC檢測、ICC檢測、IF檢測、RT-PCR技術、Western Blot技術和石蠟組織微陣列等實驗方法，研究了下述內容：1）通過對

5、不同ATC細胞的HE染色和MTT檢測技術分析其RA敏感性差異;2）采用ICC、IF以及Western Blot觀察三個細胞系中CRABP-Ⅱ和FABP5的表達情況，觀察維甲酸經典信號通路組分CRABP-Ⅱ和FABP5在三種ATC細胞系中的表達情況;3)RA對CRABP-Ⅱ和FABP5轉錄水平的影響通過RT-PCR檢測;4）去甲基化劑和FABP5抑制劑與RA聯(lián)合用藥后，通過HE染色、MTT檢測法和鏡下觀察三個細胞系RA敏感性的變化，并通過

6、ICC檢測三個細胞系加藥前后CRABP-Ⅱ和FABP5的變化情況;5）通過石蠟組織微陣列的IHC檢測技術對人甲狀腺癌組織中CRABP-Ⅱ和FABP5的表達情況進行觀察。
　　結果：
　　1.HE染色顯示，正常培養(yǎng)的三個ATC細胞系經RA處理后沒有發(fā)現(xiàn)明顯的形態(tài)學變化。MTT檢測結果發(fā)現(xiàn)RA處理組的OD值高于N組和DMSO對照組。RA處理組與N組相比，有顯著統(tǒng)計學差異(p＜0.05)，但此差異幅度較小。
　　2.ICC和

7、IF顯示在三個細胞系中CRABP-Ⅱ表達水平均非常低，而FABP5水平明顯很高。RT-PCR和Western Blot結果與上述ICC和IF結果相符合。
　　3.三個ATC細胞系用GEM或GEM/RA聯(lián)合處理后，MTT檢測結果顯示，GEM和GEM/RA聯(lián)合處理組的細胞活性與正常培養(yǎng)細胞相比有明顯降低，GEM和GEM/RA聯(lián)合處理組之間的抑制率差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　4.在RA處理之前、與RA同時處理或獨立使用

8、FABP5的抑制劑作用于ATC細胞。MTT檢測結果顯示，其未能逆轉ATC細胞的RA耐藥性，ICC結果顯示其對FABP5的表達沒有抑制作用。
　　5.將286例人甲狀腺組織標本通過其各自的形態(tài)學特征分為N、A、DTC和ATC4種病理亞型。使用組織微陣列IHC染色分析四種甲狀腺組織中的CRABP-Ⅱ和FABP5表達模式。
　　結果：顯示，不僅四種甲狀腺組織中CRABP-Ⅱ和FABP5表達模式高度變化，而且每個病理亞型中的個體情況

9、也有高度不同。
　　結論：
　　1.三種ATC細胞系沒有表現(xiàn)出明顯的RA敏感性，有促進細胞增殖的趨勢。
　　2.RA處理能夠改變ATC細胞系的CRABP-Ⅱ和FABP5的表達模式，CRABP-Ⅱ低表達和FABP5高表達的狀態(tài)可能是揭示ATC細胞RA耐藥性的原因之一。
　　3.去甲基化劑GEM及其與RA的聯(lián)合用藥處理可顯著增加三種ATC細胞的RA敏感性，顯著抑制細胞增殖，并能上調CRABP-Ⅱ的表達。
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