犬細小病毒分離鑒定及環(huán)介導等溫擴增快速檢測方法的建立.pdf

1、犬細小病毒(Canine parvovirus，CPV)，是引起犬出血性腸炎和幼犬心肌炎的主要病原，具有高度的接觸傳染性，發(fā)病率和病死率分別為20％～100％和10％～50％，給全球的養(yǎng)犬業(yè)造成很大的經濟損失。
　　 本研究主要由兩方面的內容組成：
　　 1．探究犬細小病毒上海分離株的流行和變異情況通過對上海某寵物醫(yī)院疑似犬細小病毒病例的犬糞樣中進行病毒分離，經形態(tài)學、理化學和分子病毒學等鑒定：病毒能在CRFK細胞上生長

2、，并產生細胞腫脹、變圓、破碎、脫落等細胞病變；病毒粒子在電鏡下觀察呈立體對稱，直徑為20～24nm，無囊膜；能凝集豬紅細胞，不能凝集人、雞的紅細胞，并能被犬細小病毒陽性血清所抑制。動物實驗表明，試驗組犬均出現細小病毒感染癥狀。結果顯示該分離株為犬細小病毒。
　　 參考GenBank上細小病毒3個基因型的全基因設計6對擴增引物進行PCR，分段擴增出目標片段，克隆于T載體上，測定序列并拼接，用MEGA軟件、NJ法構建進化樹。結果顯示

3、，該分離株犬細小病毒全基因為4758bp，與GenBank中各種基因型犬細小病毒的VP2基因核苷酸序列同源性比較發(fā)現，CPV-SH克隆與2a亞型犬細小病毒核苷酸同源性最高為99.7％，與2型、2b亞型、2c亞型的同源性分別為98.8％、99.5％、99.5％。最終確認CPV-SH分離株屬于犬細小病毒2a亞型，與國內北京分離株CPV/BJ082親緣關系最近，同源性為99.9％。
　　 2．研究建立一種LAMP方法來檢測犬細小病毒本