椪柑原生質培養(yǎng)過程中的氧化脅迫分析.pdf

1、原生質體再生成植株是一個復雜的發(fā)育過程，包括細胞壁再生、細胞伸長和分裂，隨后進入細胞周期并再生成胚狀體。這個過程中如果出現逆境，胞內會積累不同程度的活性氧(AOS)，產生氧化脅迫，影響原生質體再生成植株。多胺作為抗氧化劑，能清除細胞中的活性氧，提高抗氧化酶活性，影響細胞發(fā)育。本文探討了從不同材料中所分離的原生質體在細胞壁再生期間的差異，以及壁再生過程中，多胺對細胞應對氧化脅迫的影響。主要研究結果如下：
　　 1．對椪柑愈傷組織與

2、葉片酶解、分離原生質體，進行液體淺層培養(yǎng)，熒光染料Calcofluor White M2R染色觀察不同材料分離原生質體細胞壁再生時間，觀察結果表明，愈傷組織分離的原生質體在第3d就開始啟動細胞壁再生程序，到第6d完成細胞壁再生；而葉肉分離的原生質體隨著培養(yǎng)時間的延長，逐漸死亡，無法觀察到細胞壁的再生。
　　 2．對愈傷組織與葉片分離的原生質體過氧化氫與抗氧化物質活力檢測結果表明，過氧化氫與抗氧化物質的活力變化在兩個不同材料分離的

3、原生質體中出現了廣泛的差異，隨著培養(yǎng)時間的增加，過氧化氫在不能再生的原生質體中逐漸增加，而在能再生的原生質體雖然有一定的增加，但是增加幅度明顯少于葉肉分離的原生質體中過氧化氫的活力；相應的抗氧化酶，在愈傷組織分離的原生質體培養(yǎng)過程中都相應增加，但是在葉肉分離的原生質體培養(yǎng)過程，酶的活力基本保持不變，并有些呈下降的趨勢。
　　 3．添加D-Arg(10mM)處理的愈傷組織分離的原生質體，過氧化氫在原生質體隨著培養(yǎng)時間逐漸增加，相應

4、的細胞體內清除酶的活性下降；而在葉肉分離的原生質體添加腐胺(10mM)，過氧化氫在植物體內持續(xù)積累，清除酶的活性變化不明顯。
　　 4．分離椪柑愈傷組織得到原生質體，在培養(yǎng)基中添加外源多胺與多胺抑制劑進行培養(yǎng)，熒光增白劑染色觀察表明，添加了外源多胺促使原生質體細胞壁啟動提前，而添加多胺抑制劑的相對延后。
　　 5．對愈傷組織與葉片進行分離得到原生質體培養(yǎng)過程中取樣，通過FDA染色檢測得到，隨著培養(yǎng)時間的增加，愈傷組織分離