重組人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在畢赤酵母中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的：
　　1.建立有效的真核表達(dá)體系。
　　2.分泌表達(dá)出具有生物活性的HGF蛋白。
　　方法：
　　本研究首次利用pGAPZαA這一真核表達(dá)載體表達(dá)HGF蛋白。我們從gene bank上找到HGF全長(zhǎng)片段，然后根據(jù)真核表達(dá)偏愛(ài)密碼子將其合成。為得到二級(jí)結(jié)構(gòu)的HGF蛋白，我們?cè)?94位氨基酸Arg和495位氨基酸Val間添加了腸激酶序列。將HGF和pGAPZαA質(zhì)粒雙酶切后行連接轉(zhuǎn)化，構(gòu)建穿梭載體pGAPZαA

2、-HGF，測(cè)序后將穿梭載體進(jìn)行線(xiàn)性化，然后電轉(zhuǎn)化入畢赤酵母GS115進(jìn)行表達(dá)，分別在24h，48h，72h，96h取樣。將得到的蛋白行親和層析純化，然后行Western Blot檢測(cè)。最后分離小鼠原代肝細(xì)胞，采用MTT法檢測(cè)HGF蛋白的生物學(xué)活性。
　　結(jié)果：
　　成功構(gòu)建了pGAPZαA-HGF穿梭質(zhì)粒，Western Blot檢測(cè)顯示80kDa左右有陽(yáng)性條帶，HGF蛋白成功表達(dá)，在48h時(shí)表達(dá)量較好，濃度為16.6mg/

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