ATF抑制HBV的表達與拉米夫定的作用研究比較.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建特異性結合乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）X基因啟動子(X gene promoter，Xp)的鋅指蛋白(zinc finger protein，ZFP)，并與拉米夫定體外抗乙肝病毒效果進行比較。
　　方法:1.設計特異性結合HBV Xp的ZFP并載入真核表達載體中，構建重組質粒nls-ZFP-kRAB-Flag(pcDNA3.1+，ATF)、nls-ZFP-Flag(pcDNA3.1+,ZFP

2、1)、nls-kRAB-Flag(pcDNA3.1+,ZFP2)。2.通過酶切、測序鑒定重組質粒的正確性。3.Western blot和細胞免疫熒光技術鑒定重組質粒在HepG2.2.15細胞中的表達情況。4.將重組質粒轉染HepG2.2.15細胞，設空白組（Blank組）、ATF組、ZFP1組、ZFP2組、空質粒組（Empty vctor組）和拉米夫定組（3TC組），分別培養(yǎng)2d、6d、10d。用Western blot檢測各組HBx蛋

3、白的表達情況;FQ-PCR檢測各組HBV DNA復制的拷貝數;ELASA技術檢測各組HepG2.2.15細胞上清中HBsAg和HBeAg的濃度。
　　結果:1:特異性的ATF能在HepG2.2.15細胞中表達。2:ATF和3TC對HepG2.2.15細胞中X蛋白和HBV DNA的表達在三個時間點具有明顯抑制作用(P＜0.05)，且ATF的抑制作用強于3TC(P＜0.05)，6d和10d作用強于2d(P＜0.05)。3:ATF組和3

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