植物螯合肽及植物螯合肽合成酶在植物鎘耐性和積累中的作用機(jī)制研究.pdf

1、本研究以草坪草匍匐翦股穎和高羊茅及模式植物煙草作為材料，探討(1)PC在不同Cd耐性和積累水平草坪草品種中的作用；(2)植物螯合肽合成酶表達(dá)對(duì)PC生物合成、Cd耐性及積累的影響；(3)能否通過(guò)轉(zhuǎn)基因途徑提高PC水平及重金屬耐性和積累能力。 一、草坪草匍匐翦股穎和高羊茅鎘耐性和積累機(jī)制研究:　　以幼苗和懸浮細(xì)胞為材料，對(duì)匍匐翦股穎和高羊茅兩種草坪草在Cd處理?xiàng)l件下的耐性和積累水平進(jìn)行了比較，觀察到兩者在生理和生化上的不同反應(yīng)。

2、 二、AtPCS1轉(zhuǎn)基因煙草Cd耐性和積累水平的研究:　　為探索植物螯合肽合成酶(PCS)過(guò)量表達(dá)能否增強(qiáng)植物對(duì)Cd的耐性和積累能力，將擬南芥AtPCS1cDNA與CaMV35S啟動(dòng)子相連后(35S：：AtPCS1)轉(zhuǎn)入煙草，獲得了T1代轉(zhuǎn)基因植株。經(jīng)抗生素抗性篩選和分子鑒定(PCR、Southernblot和Northernblot)，證實(shí)AtPCS1在T1代中的整合和表達(dá)。用250μMCdCl2對(duì)部分轉(zhuǎn)基因植株小苗處理1個(gè)月

3、，并以根長(zhǎng)作為小苗Cd耐性的指標(biāo)。 三、利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將細(xì)菌gshI轉(zhuǎn)入匍匐翦股穎:　　本研究建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的，利用潮霉素抗性作為篩選標(biāo)記的匍匐翦股穎轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。以包含35SCaMV啟動(dòng)子和E.coligshIcDNA的pCAMBIA13011為表達(dá)載體，用農(nóng)桿菌EHA105對(duì)來(lái)源于成熟種子的胚性愈傷組織進(jìn)行感染，通過(guò)共培養(yǎng)和潮霉素抗性篩選后獲得了30株轉(zhuǎn)基因再生植株。經(jīng)過(guò)PCR和Southernblot分析后證明外源基因已