聚乙二醇限進親和介質的制備及應用研究.pdf

1、近年來，固定化金屬離子親和層析(IMAC)技術因其分離快速、分離條件溫和，成本低等優(yōu)勢而得到廣泛應用。但是在一些復雜的混合體系中，由于蛋白質大分子會與目標小分子競爭親和位點，降低了親和介質對活性小分子的分離純化效果而使其應用范圍受到了限制。為了減弱實際體系中大分子蛋白質的干擾，近年來發(fā)展起來的限進性介質具有一定的優(yōu)勢，其主要的特點是在吸附介質表面修飾一層半滲透屏障形成體積排阻效應，并結合IMAC的親和力選擇性富集目標活性分子。因此，根據

2、上述思路，研究制備了一種具有高載量、高選擇性限進性親和吸附介質。詳細的實驗結果如下:
　　(1)采用乳化交聯法制備磁性殼聚糖微球(M-CS)作為親和介質的載體，微球平均粒徑為25μm。使用環(huán)氧氯丙烷對載體進行活化，當溶脹時間為4h、活化溫度為50℃、活化時間為6h、環(huán)氧氯丙烷體積分數50％、NaOH濃度為0.4M時，環(huán)氧基密度為260μmol·g-1。通過亞氨基乙二酸(IDA)作為間隔臂螯合親和銅離子(Cu2+)，制備M-CS@C

3、u2+。選擇牛血清蛋白(BSA)為大分子蛋白模型，考察了離子強度、pH值、吸附時間、配基密度(Cu2+)對吸附效果的影響，當緩沖液離子濃度為0.02M、pH=7、吸附時間為60min，配基密度為140μmol·g-1時，對BSA(1mg·mL-1)的吸附量達到117.6mg·g-1。
　　(2)用聚乙二醇mPEG1900對親和介質進行表面修飾，當以三氟化硼為催化劑，催化劑用量（摩爾比）1∶0.08、反應時間6h，反應溫度50℃時，

4、mPEG1900接枝率達26.46％，并通過紅外光譜(FT-IR)、掃描電子顯微鏡（SEM）、差式量熱分析儀(DSC)及熱失重(TG)對其進行了表征。研究了接枝率對阻擋BSA吸附效果的影響，限進親和介質對BSA的吸附量隨著mPEG1900的接枝率升高而降低。當介質配基密度為140μmol·g-1，表面mPEG1900接枝率為26.46％時，介質對BSA的阻拒率達到50.68％。
　　(3)為了進一步探索限進親和介質的應用效果，以V

5、al-Ser-Leu-Pro-Glu-Try(VW-6)為小分子肽模型，BSA為大分子蛋白模型分子，建立了模擬混合體系以及酪蛋白酶解體系，比較了mPEG1900修飾前后親和介質在混合體系以及酪蛋白酶解體系中對小分子的吸附選擇性以及對大分子的阻拒效果。結果表明限進親和介質對VW-6的吸附效果有提高，對大分子BSA的吸附具有一定的阻擋效果。說明限進性金屬離子親和介質能夠有效的富集小分子多肽，減少大分子蛋白的非特異性吸附，為提高活性小分子的分