應(yīng)用實(shí)時熒光PCR方法鑒別食品中的鴨源性成分.pdf

1、食品中肉類鑒別對維護(hù)市場公平和消費(fèi)者權(quán)益有重要意義。食品的鑒別和質(zhì)量控制需要對來源不明確的DNA進(jìn)行靈敏的檢測。食品中肉類成分的鑒別與分析技術(shù)已逐步形成了以核酸檢測為基礎(chǔ)的方法體系，其檢測精度可達(dá)屬與亞屬水平。本研究主要利用多種實(shí)時熒光PCR技術(shù)對食品中的鴨源性成分進(jìn)行了鑒別，探究了不同加工方式對普通實(shí)時熒光PCR和巢式實(shí)時熒光PCR的影響，并建立了鑒別血旺中豬雞鴨三種血液成分的多重實(shí)時熒光PCR檢測方法。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:

2、>　　1.含有擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)的實(shí)時熒光PCR法檢測食品中的鴨肉成分
　　基于鴨的細(xì)胞核中特異性基因序列(IL-2)，設(shè)計相應(yīng)引物和TaqMan探針，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建一段隨機(jī)序列作為擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)，設(shè)計內(nèi)標(biāo)探針，通過對PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了添加有擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)的用于檢測食品中鴨肉成分的實(shí)時熒光PCR方法。通過擴(kuò)增曲線和Ct值分析該方法的特異性、檢測限和靈敏度，并探究三種不同加工方式對該檢測方法的影響。結(jié)果表明:TaqMan探針實(shí)時熒光P

3、CR法具有很高的特異性，本方法可以檢測出0.05ng的鴨DNA，其靈敏度可達(dá)0.1％。高溫高壓處理會降低該檢測方法的靈敏度，煮制和超高壓處理對檢測靈敏度無顯著影響。
　　2.巢式實(shí)時熒光PCR法檢測食品中的鴨肉成分
　　為提高實(shí)時熒光PCR在檢測加工肉制品時的靈敏度，本研究建立了用于鴨肉鑒別的巢式實(shí)時熒光PCR法并探究了三種不同加工方式對該方法的影響。結(jié)果表明巢式實(shí)時熒光PCR法可提高PCR檢測的檢出限和靈敏度，能夠檢測出0

4、.5pg的鴨DNA，檢測靈敏度可達(dá)0.01％。高溫高壓處理會降低其靈敏度，煮制和超高壓處理對檢測無顯著影響，該方法在對鮮肉和加工過的肉制品進(jìn)行鑒別時是一種快速靈敏的檢測手段。
　　3.多重實(shí)時熒光PCR檢測血旺中鴨豬雞血液成分
　　本實(shí)驗(yàn)基于動物細(xì)胞核DNA中特異性位點(diǎn)建立了準(zhǔn)確可靠的多重TaqMan實(shí)時熒光PCR方法用于檢測血旺中的鴨，豬和雞血液成分。分析比較了血液提取試劑盒，血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒和酚/氯