嗜酸乳桿菌NX2-6類細菌素高產菌株選育及應用的研究.pdf

1、乳酸菌(LAB)是被廣泛公認為安全(GRAS)級別的食品級微生物，能夠產生雙乙酰、有機酸（乙酸和乳酸）、細菌素和類細菌素等能殺滅食源性致病菌和食物腐敗菌的抑菌物質。將發(fā)酵乳酸菌產生的抑菌物質應用于食品防腐保鮮中可以有效提高食品的安全性，有成為天然食品防腐劑的巨大潛力。
　　乳酸菌發(fā)酵產類細菌素的產量通常較低，沒有辦法滿足工業(yè)生產的需要，因此提高類細菌素的產量尤為的重要?；蚪M改組技術是近些年來發(fā)展起來的一種微生物新興育種技術，能夠

2、對類細菌素的增產起到良好的作用。
　　本研究以本實驗室中保藏的一株嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)NX2-6為出發(fā)菌株，采用多種選育方式提高其產類細菌素的能力，以期獲得性質穩(wěn)固的高產菌株，為工業(yè)化生產和應用奠定良好基礎。主要研究成果如下:
　　1.通過物理和化學方法對嗜酸乳桿菌NX2-6誘變選育，獲得類細菌素產量提高的菌株。分別采用60Coγ射線、DES誘變和原生質體紫外誘變三種誘變方法對其進

3、行誘變處理，通過計算致死率和正突變率，確定了60Coγ射線的最佳誘變劑量為2.0 kGy;DES誘變最佳濃度為0.7％，最佳作用時間為10 min;原生質體紫外誘變最佳紫外照射時間為20 s。經過初篩和復篩，篩選到3株高產菌，γ56、D47和UV156，其抑菌效價分別比出發(fā)菌株提高了2.56倍、2.04倍和2.96倍。
　　2.對嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)NX2-6原生質體制備、再生及滅活條件

4、進行研究，確定制備原生質體的最適條件為:將處于對數(shù)期的種子液進行二次轉接，在培養(yǎng)6h后收集菌體;選用高鹽緩沖液作為洗滌高滲液;再生培養(yǎng)基蔗糖濃度為0.2mol/L;最適溶菌酶的濃度為30 mg/mL;酶解溫度在37℃最佳;酶解時間在40 min時最好。原生質體滅活最佳條件:熱滅活溫度為58℃、滅活時間為30 min;紫外滅活滅活時間為110s。
　　3.對高產菌株γ56、D47和UV156進行多輪基因組改組。確定了PEG誘導原生質

5、體融合的最佳條件:PEG6000濃度為50％，pH值為9.0，誘導融合時間為10 min。獲得一株抑菌活性有明顯提高的融合子F50。通過測定其類細菌素抽提液的抑菌效價得出，其對藤黃微球菌的抑菌效價為30912.15 U/mL，比出發(fā)菌株抑菌效價(5495.41U/mL)提高了5.6倍，且傳代10代穩(wěn)定性良好。
　　4.嗜酸乳桿菌NX2-6產生的抑菌物質對蘋果汁保鮮的應用研究表明，在28℃、45℃儲存條件下，分別添加0.1％和0.2