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文檔簡介
1、青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensis)及其傳播的血液原蟲病嚴重威脅著中國畜牧業(yè)的發(fā)展.目前對蜱的防治主要以藥物防治為主.但隨著蜱耐藥性的產(chǎn)生以及環(huán)境污染和藥物殘留等嚴重公共衛(wèi)生問題的出現(xiàn)迫使人們尋求防治的新途徑.在眾多控制蜱的方法中,免疫學防制是前景最誘人的方法.該研究采用兩種不同的免疫途徑制備了羊抗青海血蜱唾液腺蛋白陽性血清和羊抗青海血蜱唾液蛋白陽性血清.應(yīng)用Western Blot方法,將上述兩種血清分別與
2、青海血蜱唾液腺蛋白提取物雜交以進行蛋白的差異顯示.結(jié)果表明羊抗青海血蜱唾液腺蛋白陽性血清能識別青海血蜱唾液腺更多的蛋白帶.這些差異蛋白的分子量分別為49kDa、35.8kDa、31kDa和23.5kDa.通過制備性電泳,將所發(fā)現(xiàn)的差異條帶切取回收并免疫家兔,獲得兔抗青海血蜱差異蛋白陽性血清.以半飽血青海血蜱的唾液腺、馬氏管和卵巢等器官為材料,構(gòu)建青海血蜱的cDNA表達文庫,庫容量約為2×106pfu/ml.利用兔抗青海血蜱差異蛋白陽性血
3、清對青海血蜱cDNA表達文庫進行免疫學篩選,共獲得Hq02、Hq03、Hq04、Hq05和Hq06等5個陽性克隆.經(jīng)鑒定這5個基因均為青海血蜱所固有的新發(fā)現(xiàn)基因,它們的大小依次為1085bp、726bp、617bp、847bp和1178bp.在大腸桿菌中分別對Hq02、Hq04和Hq05基因進行了表達,利用表達產(chǎn)物免疫羊所得陽性血清能與青海血蜱天然蛋白發(fā)生免疫學反應(yīng).說明表達產(chǎn)物具有良好的免疫原性和反應(yīng)原性.這為研制青海血蜱的分子疫苗奠
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