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文檔簡介
1、慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）引起的一種嚴重危害人類健康的傳染性疾病。乙肝病毒的復制依賴其模板共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)，但目前慢性乙肝的治療藥物包括干擾素、核苷類似物等，均不能有效清除cccDNA，還易引起病毒的耐藥性突變，使發(fā)展新的治療藥物十分具有意義。
CRISPR/Cas9基因組編輯系統(tǒng)是目前基因工程領域研究的熱點，它是一種由RNA指導Cas9蛋白對靶向基因進行修飾的
2、技術。該技術具有構建方便、高效介導基因定點敲入和基因組點突變、以及更高的安全性等特點，為慢性乙型的治療提供了一種新的思路。人們可以針對病毒基因組的保守區(qū)域選擇靶點設計導向 RNA,引導對病毒基因組特別是cccDNA的清除。 3、> 在證明此系統(tǒng)的抗乙肝病毒效果后，我們針對DNA作為基因藥物體內(nèi)作用的瓶頸問題：缺乏高效、安全的體內(nèi)輸送系統(tǒng)，開展了進一步研究。我們嘗試利用本實驗室設計的兩種具有不同電離態(tài)的陽離子脂質構建 CRISPR/Cas9質粒的輸送載體，獲得了粒徑均一、并在血清條件下穩(wěn)定的納米載體粒子，并對其通過靜脈注射轉染肝細胞并抑制乙肝病毒的效果進行了深入研究。我們使用模擬乙肝病毒感染的小鼠（尾靜脈高壓注射1.3倍乙肝病毒質粒）作為動物模型，考察脂質和C
我們針對乙肝病毒的基因組設計了多條導向 RNA(guide RNA，gRNA),構建了 CRISPR/Cas9質粒，在細胞水平和動物模型上篩選并驗證了它們抑制乙肝病毒和清除乙肝病毒cccDNA的效果。
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