扇貝邊多肽制備及其生物活性研究.pdf

1、海灣扇貝是一種具有很高經(jīng)濟價值的雙殼類動物，目前在我國東部沿海廣泛養(yǎng)殖。在生產扇貝柱(干貝)的過程中會產生大量低值副產物(包括裙邊、貝殼、生殖腺)，這些副產物容易腐爛，會引起環(huán)境污染。海灣扇貝邊蛋白質含量較高，是制備活性肽（蛋白酶解物）的良好原料。本論文分析了海灣扇貝邊的化學組成，優(yōu)化了海灣扇貝邊蛋白酶解的條件，并對酶解產物的部分生物活性進行了研究。本研究為海灣扇貝邊的開發(fā)與利用提供了理論和實驗依據(jù)。
　　研究結果顯示：扇貝邊干粉

2、營養(yǎng)豐富，總蛋白質的含量為68.16g/100g，總脂肪含量為3.50g/100g，水分含量為5.50g/100g，多糖含量為1.43g/100g，灰分含量為11.80g/100g。17種氨基酸的總量為69.30g/100g，人體必需氨基酸（色氨酸除外）含量為22.79g/100g。具有較強還原能力的半胱氨酸的含量為5.86g/100g，是扇貝邊酶解多肽具有較強抗氧化活性的主要原因之一。共檢測了27種脂肪酸的相對含量。其中飽和脂肪酸含量

3、為27.53％，不飽和脂肪酸的含量為56.19%。油酸的相對含量最高為21.66%，其次為棕櫚酸和亞油酸。
　　以水解度為考察指標，對中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶水解扇貝邊的能力進行了探究。發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶對扇貝邊的水解能力最強，因此確定利用堿性蛋白酶來水解扇貝邊制備酶解多肽。利用單因素實驗和正交實驗對堿性蛋白酶水解扇貝邊的條件進行了優(yōu)化，結果顯示：影響堿性蛋白酶活性的各因素的排列順序為pH、溫度、底物濃度與酶濃度

4、的比值（[S]/[E]）、時間。最佳水解條件：[S]/[E]為12、時間為4h、溫度為60℃、pH為10。在此條件下水解率為30.1%。探究了活性炭對扇貝邊酶解液的脫色效果。當活性炭用量為2%、時間為60min、溫度為40℃、pH為6時脫色效果最好。
　　利用快速蛋白液相色譜（FPLC）、高效液相色譜（HPLC）和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）技術對扇貝邊酶解液中多肽的組成及其主要組分的分子量進行了測定。結

5、果表明扇貝邊酶解多肽中主要有3種多肽成分，它們的分子量分別為7.87、3.54和0.91kD。
　　以谷胱甘肽為對照物，探究了扇貝邊酶解多肽的抗氧化能力。結果表明，扇貝邊酶解多肽對羥自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH自由基）和ABTS+自由基的清除能力與酶解多肽的濃度呈現(xiàn)一定的量效關系。隨著酶解多肽濃度的增加，對3種自由基的清除能力逐漸增大。當酶解多肽的濃度分別為0.20mg/mL、0.20mg/mL和0.25

6、mg/mL時，其對羥自由基、DPPH自由基和ABTS+自由基的清除率達到最大值，分別為65.5%、79.3%和62.3%。以羥自由基清除率和DPPH自由基清除率為指標分別測定了分子量大于3kD和小于3 kD的多肽組分的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)分子量小于3kD的多肽組分有較強的抗氧化能力。
　　考察了扇貝邊酶解多肽的降血壓和降血糖活性。當扇貝邊酶解多肽的濃度為0.40mg/mL和0.50mg/mL時，其對ACE酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率達到

7、最大值，分別為65.1%和54.8%。IC50值分別為0.32mg/mL和0.38mg/mL。以對ACE酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率為指標測定了分子量大于3kD和小于3kD的多肽組分的降血壓和降血糖活性，發(fā)現(xiàn)分子量小于3kD的多肽組分具有較強的降血壓和降血糖活性。
　　本論文利用百草枯對模型組和治療組小鼠進行灌胃造模，利用扇貝邊酶解多肽對治療組的小鼠進行灌胃治療。分別于造模后14天和28天進行肺組織取材，對肺組織進行HE染色并測定肺