植物內生菌Myrothecium roridum次生代謝產物研究.pdf

1、摘 要植物內生菌廣泛存在于宿主植物體內，與宿主植物互惠共生，協(xié)同進化。其代謝途徑特殊，能夠產生豐富多樣的活性代謝產物，為解決某些藥用植物生長緩慢、資源緊缺等引起的藥源匱乏和生態(tài)破壞等問題提供了新思路。植物內生菌次生代謝產物成為發(fā)現(xiàn)新藥及新藥先導化合物的重要途徑之一。南京大學功能生物分子研究所從山麻黃莖中分離獲得肱r o r i d u m I F B ．L L Y ，從黃花蒿根部分離獲得M r o r i d u m I F B ．E

2、0 9 1 ，本學位論文對這兩株內生真菌的固體發(fā)酵產物進行了研究。I F B ．L L y 和I F B ．E 0 9 1 固體發(fā)酵產物經氯仿／甲醇( v ／v 1 ：1 ) 混合溶劑浸提數(shù)次，減壓去除溶劑，分別得粗浸膏5 2g 和3 8 g 。以1 H - N M R 譜和T L C 示蹤，采用硅膠柱層析、S e p h a d e xL H ．2 0 凝膠柱層析和高效液相色譜等方法對上述固體發(fā)酵產物粗浸膏中的化學成分進行分離純化，結

3、果從Mr o r i d u m I F B ．L L Y 固體發(fā)酵產物中分離獲得1 1 個化合物( 1 ～1 1 ) ，從Mr o r i d u m I F B ．E 0 9 1 固體發(fā)酵產物中分離獲得3 個化合物( 1 2 ～1 4 ) ( 本課題組前期已從I F B ．E 0 9 1 中分離獲得1 個新單端孢霉烯大環(huán)內酯r o r i t o x i nE 、2 個已知甾體化合物和1 個已知生物堿) 。采用高分辨質譜( H R

4、．E S l - l 訌S ) 、1 D 和2 D 核磁共振譜( N M R ) 、紫外光譜( U V ) 、圓二色譜( C D ) 等現(xiàn)代波譜技術對獲得的化合物進行結構鑒定，上述化合物分別被鑒定為： 1 ．甲氧基吩嗪( 1 ．m e t h o x y p h e n a z i n e ，1 ) 、吩嗪．1 ．羧酸( 1 - p h e n a z i n e e a r b o x y l i c a c i d ，2 ) 、N

5、- m e t h y l - 1 H - i n d o l e - 2 - c a r b o x a m a i d e ( 3 ) 、尿嘧啶( u r a c i l ，4 ) 、胸腺嘧啶( t h y m i n e ，9 ) 、甲基硫赭曲菌素( m o n o m e t h y l s u l o c h r i n ，6 ) 、d i t r y p t o p h e n a l i n e( 7 ) 、胡蘿卜苷( d

6、 a u c o s t e r o l ，8 ) 、7 , 8 ．二甲基異咯嗪( 1 u m i c h r o m e ，9 ) 、1 ．3 , 9 ．三甲基尿酸( 1 , 3 ，9 - t r i m e t h y l u r i ca c i d ，1 0 ) 、( ．S ) - ( - ) - N - 【2 - 0 - H y d r o x y - 2 - O X O 一2 ，3 一d i h y d r o 一1 H -

7、 i n d o l 一3．y 1 ) 一e t h y l 】．a c e t a m i d e ( 1 2 ) 。其中，化合物1 2 未見文獻報道，為新化合物；化合物1 l 、1 3和1 4 結構有待繼續(xù)鑒定。本研究還采用M T T 法對化合物l 、2 、3 、6 、7 和1 2 進行抗腫瘤活性測定，結果發(fā)現(xiàn)，化合物3 對人肝癌細胞S M M C ．7 7 2 1 具有一定的抗腫瘤活性，其I C s o 值為4 0 ．0l l g

8、 ／m l ( O ．2 3 0p M ) ，陽性對照順鉑的I C s o 值為1 1 ．5 p g ／m l ( 0 ．0 6 6B M ) 。植物內生菌Mr o r i d u m 固體發(fā)酵能產生多種結構類型化學成分，如：單端孢霉烯大環(huán)內酯類、生物堿類、甾體類等，它們具有多種生物活性。植物內生菌肱r o r i d u m 能夠為藥理活性篩選提供化合物來源，化學成分值得進一步深入研究。關鍵詞：植物內生菌；Mr o r i d u m

9、 ；次生代謝產物；分離純化：結構鑒定：細胞毒活性目 錄中文摘要英文摘要縮略詞表第一章植物內生菌抗腫瘤活性次生代謝產物研究進展????????．·l1 ．1 植物內生菌產生的抗腫瘤活性成分?????????????????????21 ．2 抗腫瘤活性成分篩選思路?????????????????????????1 01 ．2 ．1 靶向端粒酶???????????????????????????l O1 ．2 ．2 靶向微管和

10、微管蛋白???????????????????????1 01 ．2 ．3 基于腫瘤新生血管????????????????????????1 11 ．2 ．4 靶向細胞信號轉導通路??????????????????????1 11 ．2 ．5 誘導腫瘤細胞凋亡????????????????????????1 11 ．2 ．6 其它?????????????????????··：????????1 11 ．3 植

11、物內生菌研究存在的問題和展望????????????????????1 2參考文獻????????????????????????????????1 2第二章植物內生菌膨r o r i d u m 次生代謝產物研究?????????- ．1 72 ．1 儀器與試劑??????????????????????????????1 82 ．1 ．1 實驗儀器????????????????????????????1 82 ．1 ．2 實驗材料

12、與試劑?????????????????????????1 82 ．2 實驗方法???????????????????????????????1 82 ．2 ．1 菌株來源及發(fā)酵方法???????????????????????1 82 ．2 ．2 發(fā)酵產物提取??????????????????????????1 92 ．2 ．3 發(fā)酵產物分離與純化分離與純化??????????????????1 92 ．2 ．4 化合物結構鑒定??

13、???????????????????????2 12 ．2 ．5 M T T 法測定化合物的體外細胞毒活性????????????????2 12 ．3 實驗結果???????????????????????????????2 22 ．3 ．1 化合物結構解析?????????????????????????2 22 ．3 ．2 化合物結構鑒定?????????????????????????3 32 ．3 ．3 化合物的體外細胞毒活