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文檔簡介
1、苯乳酸(phenyllactic acid，PLA)是一種天然生物防腐劑，能抑制多種引起食品腐敗的真菌和細菌。乳酸菌中的芳香族氨基酸轉氨酶能夠將苯丙氨酸轉化為苯丙酮酸進而還原為苯乳酸，是產(chǎn)苯乳酸的限速酶。
根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中Lactobacillus casei str.Zhang全基因組序列中的芳香族氨基酸轉氨酶基因設計引物，以副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei W2）基因組DNA為模板，PCR擴
2、增基因并連接到pMD19-T載體。測序結果表明:L.paracasei W2芳香族氨基酸轉氨酶基因長1164bp，與L.casei str.Zhang的基因序列相似性為100％。
分析和預測副干酪乳桿菌(L.paracasei W2)芳香族氨基酸轉氨酶基因及其編碼蛋白的結構和特性，以指導其生物學功能的實驗研究。對編碼蛋白進行疏水性分析、磷酸化位點預測、二級、三級結構預測并構建分子進化樹。結果表明該基因編碼387個氨基酸，理論相
3、對分子質量是41961.2Da，等電點為6.03，具有完整的保守結構域和保守功能位點，該蛋白有兩個跨膜螺旋區(qū)。與干酪乳桿菌的進化關系最近。
將芳香族氨基酸轉氨酶基因連入表達載體，成功構建重組表達質粒，轉化至E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞中，優(yōu)化誘導目的蛋白表達。經(jīng)SDS-PAGE分析顯示出42kD的特征性蛋白條帶，與預期大小一致。對重組芳香族氨基酸轉氨酶進行酶學性質研究，其酶活測定的最適pH為6.8、最適溫度為50
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