小鼠ACE2基因真核表達載體的構建及其對血管平滑肌細胞增殖的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本研究擬構建小鼠ACE2基因的真核表達載體，并觀察ACE2基因轉染大鼠血管平滑肌細胞(VSMC)后對AngII促VSMC異常增殖效應的影響，初步探討產生該影響的可能機制。 方法:1.通過RT-PCR從小鼠腎臟擴增出小鼠ACE2基因全長cDNA，并通過酶切連接、轉化等分子生物學方法將其連接到載體pcDNA3.1/Hygro(+)上，從而構建小鼠ACE2基因的真核表達載體pm-ACE2，并通過酶切和測序鑒定。2.通過脂質體法將

2、所構建的pm-ACE2轉染COS-7細胞，48小時后收集蛋白，經(jīng)過Western-Blot來驗證該pm-ACE2的表達功能。3.用脂質體法將pm-ACE2轉染原代培養(yǎng)的大鼠胸主動脈VSMC后給予AngII(終濃度10-7mol/L)處理，同時設正常細胞組、AngII組和空載體pcDNA3.1/Hygro(+)轉染+AngII組作為對照，通過CCK8和檢測各組細胞周期兩項指標來觀察ACE2基因轉染對Ang II促VSMC增殖效應的影響，初

3、步探討ACE2發(fā)揮上述作用的機制。 結果:1.通過測序證實成功克隆小鼠ACE2基因全長cDNA并將其連接至載體pcDNA3.1/Hygro(+)上，測序結果提示存在3處同義突變；2.所構建的pm-ACE2在真核細胞中具有表達功能；3.AngII組OD值較正常細胞組明顯增高(P<0.05)，pmACE2+AngII組與AngII組相比OD值顯著降低(P<0.05)；4.與正常細胞組相比，AngII組處于G0/G1期VSMC的百分率

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