PRR11-SKA2“基因對”在乳腺癌中的功能及表達調控機制初探_3267.pdf

1、腫瘤相關基因PRR11（proline-rich11）和SKA2(spindle and kinetochore associated complex subunit2)，均定位于染色體17q22區(qū)，兩者共享一個獨特的雙向啟動子，組成一個獨特的轉錄單元，是一個典型的“頭對頭”“基因對”（head-to-head gene pair）。我們課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，肺癌細胞中，PRR11和SKA2受到轉錄因子NF-Y和p53的調控，并與細胞

2、周期調控和腫瘤發(fā)生發(fā)展均密切相關。肺癌組織中，PRR11和SKA2基因表達水平均顯著升高，且高水平的基因表達與肺癌病人的預后水平顯著負相關；此外在肺癌細胞中，PRR11和SKA2的敲降能夠顯著抑制細胞的增殖、遷移、侵襲等生理過程。
　　在此基礎上，本研究將對PRR11-SKA2“基因對”在乳腺癌中的功能及表達調控機制進行初步探索。
　?。?）PRR11-SKA2“基因對”與乳腺癌預后的關聯(lián)性分析
　　利用GEO數(shù)據(jù)庫，

3、獲得乳腺癌芯片GSE3494及GSE4922中PRR11和SKA2的表達信息以及預后數(shù)據(jù)，分析PRR11和SKA2在乳腺癌中的預后價值。即采用生物信息學方法，分析PRR11及SKA2的表達水平與乳腺癌預后的關聯(lián)性。結果表明，PRR11與SKA2低表達組的病人生存期明顯高于高表達組。
　?。?）抑制PRR11與SKA2的表達對乳腺癌細胞增殖、遷移及侵襲能力的影響
　　采用siRNA干擾技術，分別在MCF-7、MDA-MB-23

4、1細胞中將PRR11與SKA2單獨沉默或聯(lián)合沉默。細胞表型分析結果表明，在兩種乳腺癌細胞系中，與陰性對照組細胞相比，PRR11與 SKA2單獨沉默組和聯(lián)合沉默組細胞的增殖、遷移及侵襲能力均明顯降低；與單獨沉默組細胞相比，PRR11與SKA2聯(lián)合沉默后，細胞遷移及侵襲能力的降低程度更為顯著。由此可以推測，PRR11與SKA2在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用，且兩者在功能上可能具有一定的協(xié)同或互補效應。定量RT-PCR驗證結果分析表明，PR

5、R11與SKA2單獨沉默或聯(lián)合沉默后，多個與細胞增殖、遷移或侵襲相關基因的表達表現(xiàn)出不同程度的變化。該結果提示，PRR11與 SKA2有可能通過影響這些基因的表達變化參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。
　?。?）NF-Y對PRR11-SKA2“基因對”的轉錄調控分析
　　以前期構建的啟動子熒光素酶報告基因重組體為模板，構建不同長度的PRR11-SKA2啟動子截短突變重組體，將這些重組體單獨轉染或與NFYB真核表達質粒共轉入MCF-7

6、細胞，并檢測各重組體啟動子活性。分析結果發(fā)現(xiàn)，PRR11-SKA2啟動子在乳腺癌細胞中具有雙向啟動子活性，NFYB對PRR11和SKA2方向的轉錄無明顯驅動作用；但是，在乳腺癌細胞中干擾NFYB表達，用定量RT-PCR檢測PRR11及SKA2的mRNA表達水平，結果發(fā)現(xiàn)NFYB基因沉默后可導致PRR11的轉錄下調，但不影響SKA2的表達；進一步采用生物信息學方法分析乳腺癌組織中NFYB與PRR11-SKA2表達的相關性，發(fā)現(xiàn)NFYB與P

7、RR11的表達相關，而與SKA2的表達不相關。
　?。?）轉錄因子p53對PRR11-SKA2“基因對”的轉錄調控及臨床意義分析
　　將PRR11-SKA2啟動子報告基因系列截短體分別單獨轉染或與p53真核表達質粒共轉染MCF-7細胞，并檢測各重組體啟動子活性。實驗結果顯示，p53能夠顯著抑制各截短體的啟動子活性。乳腺癌芯片數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，與野生型p53組相比，突變型p53組乳腺癌組織中PRR11及SKA2的表達顯著升高。p5

8、3與PRR11-SKA2“基因對”的聯(lián)合預后分析發(fā)現(xiàn)，p53未突變、PRR11及SKA2低表達的病人生存期，明顯高于p53突變、PRR11及SKA2高表達的病人。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn) PRR11-SKA2“基因對”的表達與乳腺癌的預后負相關，可作為乳腺癌預后因子，PRR11-SKA2“基因對”在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用，且轉錄因子NF-Y、p53可調控PRR11-SKA2“基因對”的表達。本研究豐富了對PRR11-