IL-1β對腦微血管內皮細胞缺氧復氧模型的促血管生成作用研究.pdf

1、研究背景:
　　 缺血性腦血管病是一種致死率、致殘率較高的臨床常見病、多發(fā)病，給社會、家庭及個人帶來了嚴重的精神和經濟負擔，因此采取有效的方法治療缺血性腦血管病，降低患者的致殘程度，提高其生活質量，成為當前醫(yī)學領域的研究重點。因此，誘導缺血區(qū)新生血管的大量形成，改善缺血區(qū)腦組織的微循環(huán)，增加受累腦組織的血液供應，保護神經元減輕腦組織損傷，成為缺血性腦血管疾病治療的新途徑。神經炎癥在缺血再灌注后的作用較為復雜，某些炎癥因子如白介素

2、-1β（IL-1β）可表現(xiàn)出神經損傷和神經保護雙向作用，如何盡量減少其神經損傷作用而增強其神經保護作用將是一個重要研究課題。
　　 研究目的:
　　 研究IL-1β對大鼠腦微血管內皮細胞缺氧復氧模型的促血管生成作用。
　　 研究方法:
　　 分離純化BMEC、Ⅷ因子相關抗原(ⅧF-Ag)鑒定，細胞計數(shù)法繪制生長曲線、MTT法測定細胞活力。(2)MTT法測定不同濃度IL-1β對正常培養(yǎng)狀態(tài)BMEC活力的影響

3、。(3)純化的BMEC置于厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h后，再進行復氧，建立缺氧復氧模型。(4)給予IL-1β中和抗體后，觀察BMEC自分泌的IL-1β對細胞培養(yǎng)上清液中VEGF、MMP-9蛋白表達的影響。(5)、實驗分為正常組、缺氧復氧組、缺氧復氧+IL-1β組，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清液中VEGF、MMP-9蛋白水平變化；實時熒光定量PCR(qRT-PCR)測定細胞VEGF、MMP-9mRNA表達量變化。(6)建立三維細胞

4、培養(yǎng)模型，觀察IL-1β對BMEC形成小管樣結構的作用。
　　 結果:
　　 (1)獲得了純度較高、數(shù)量較多的符合實驗要求的BMEC，該細胞在培養(yǎng)第120h時細胞活力最強。(2)MTT結果顯示，1ng/m1IL-1β在加藥后12h能顯著降低大鼠BMEC的活力。(3)缺氧4h/復氧72h時，IL-1β組VEGF、MMP-9蛋白表達均高于模型組(P＜0.05)。(4)缺氧4h復氧48h，IL-1β組VEGF、MMP-9mRN