GLP-1(28-36)多肽對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的糖尿病的影響.pdf

1、背景：糖尿病是一種以高血糖為重要特征的代謝性疾病，主要分為1型和2型糖尿病。大量未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)腔中堆積時(shí)誘發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ER stress)反應(yīng)可能引起胰島β細(xì)胞功能發(fā)生損傷，甚至凋亡，從而使糖尿病發(fā)生進(jìn)一步的惡化。Akita小鼠是一種糖尿病模型鼠，小鼠胰腺組織中發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致了Akita小鼠體內(nèi)胰腺β細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而出現(xiàn)了高血糖的特征。胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)是一種由腸道L細(xì)胞分泌的腸促激

2、素，并具有降低血糖和調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的作用。GLP-1(28-36)是GLP-1被中性內(nèi)肽酶酶切后的代謝產(chǎn)物，通常被認(rèn)為沒(méi)有生物功能。然而，最近的研究表明，GLP-1(28-36)在體外和體內(nèi)均有類胰島素作用。
　　目的：本論文主要探索GLP-1(28-36)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的糖尿病的影響。實(shí)驗(yàn)方法：用微波固相合成法合成片段肽GLP-1(28-36)，并構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)GLP-1受體(GLP-1R)的大鼠胰島素瘤(INS-1)細(xì)胞，

3、檢測(cè)GLP-1(28-36)對(duì)INS-1細(xì)胞內(nèi)cAMP水平的影響，并測(cè)定GLP-1(28-36)對(duì)GLP-1R的結(jié)合活性。檢測(cè)了GLP-1(28-36)對(duì)毒胡蘿卜素(TG)誘導(dǎo)小鼠胰島素瘤(beta-TC6)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的影響。此外，用蘇木精-伊紅染色(H&E)檢測(cè)GLP-1(28-36)處理Akita小鼠前后胰島面積的變化，也檢測(cè)了Akita小鼠相關(guān)生理指標(biāo)如血糖和體重變化，最后用蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)檢測(cè)

4、了Akita小鼠胰臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)通路相關(guān)蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：無(wú)論是大鼠胰島素瘤細(xì)胞(INS-1細(xì)胞)還是穩(wěn)定過(guò)表了人GLP-1受體(GLP-1R)的INS-1細(xì)胞，GLP-1(28-36)均能升高細(xì)胞中cAMP的水平。GLP-1(28-36)對(duì)TG誘導(dǎo)beta-TC6細(xì)胞發(fā)生的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中相關(guān)蛋白有顯著的調(diào)控作用。連續(xù)四周每日給予Akita小鼠腹腔注射GLP-1(28-36)，Akita小鼠的體重增長(zhǎng)速度得到顯著抑