肝細胞核因子4α介導p38MAPK信號轉導誘導肝癌細胞凋亡的研究.pdf

1、目的:研究肝細胞核因子4α（HNF4α）對肝癌細胞凋亡的影響以及與p38MAPK信號轉導通路的關系，揭示HNF4α抗肝癌的機制。
　　方法:
　　1.收集處于對數(shù)生長期的肝癌細胞HepG2，利用陽離子聚合物轉染技術用外源基因pCMVHNF4α轉染肝癌細胞HepG2，對照組轉染pEGFP-N1，轉染24h后將培養(yǎng)基更換為新鮮的10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24h熒光顯微鏡觀察對照組綠色熒光蛋白表達，選取三個視野白光下計

2、算視野內細胞數(shù)，激發(fā)光下計算同視野發(fā)綠色熒光的細胞數(shù)，計算對照組轉染效率，Western blot檢測目的基因在肝細胞HepG2中的蛋白表達。
　　2.p38MAPK信號通路阻斷劑SB203580阻斷p38MAPK信號轉導通路，AnnexinV-FITC-PI雙染細胞后，流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率，比較轉染HNF4α組的肝癌細胞HepG2凋亡率與轉染pCMV組以及HNF4α+SB203580組凋亡率。RT-PCR檢測凋亡相關基C

3、aspase-3、Fas表達量，比較HNF4α組兩種基因表達量與pCMV組以及HNF4α+SB203580組兩種基因表達量。
　　結果:
　　1.利用陽離子聚合物轉染技術用HNF4α轉染肝癌細胞HepG2，熒光顯微鏡下觀察對照組綠色熒光蛋白表達，計算48h時對照組轉染效率為57％，Western blot檢測轉染HNF4α蛋白表達，實驗組表達量明顯高于對照組，與對照組相比HNF4α蛋白表達量有顯著差異。
　　2.流式細

4、胞儀檢測各組凋亡率，轉染HNF4α組的肝癌細胞HepG2凋亡率與轉染pCMV組以及HNF4α+SB203580組凋亡率相比均明顯升高，HNF4α組凋亡率與pCMV組和HNF4α+SB203580組有顯著性差異。RT-PCR檢測凋亡相關基因Caspase-3、Fas表達量，HNF4α組兩種基因表達量比轉染pCMV組以及HNF4α+SB203580組兩種基因表達量明顯升高，HNF4α組Caspase-3、Fas表達量與pCMV組和HNF4α