Mfn2在支氣管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、目的:
　　研究氧化應(yīng)激引起大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的增殖的分子機(jī)制，探求基因蛋白線粒體融合蛋白2（mitofusin2）在氧化應(yīng)激引起支氣管平滑肌細(xì)胞的增殖的作用，為哮喘疾病發(fā)生機(jī)制及防治提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　培養(yǎng)SD大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞，探討H2O2在體外對(duì)支氣管平滑肌細(xì)胞增殖影響的量效和時(shí)效關(guān)系;行四唑鹽(MTT)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)支氣管平滑肌細(xì)胞增殖;測(cè)量增殖過(guò)程中線粒體膜電位（羅丹明123作為熒光探針）的變化;用

2、熒光定量PCR方法檢測(cè)Mfn2mRNA在支氣管平滑肌細(xì)胞增殖過(guò)程中的表達(dá);用Western-blot技術(shù)檢測(cè)H2O2刺激后支氣管平滑肌細(xì)胞增殖過(guò)程中Mfn2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.分別用0、25、50、100、200μmol/L濃度H2O2作用支氣管平滑肌細(xì)胞6、12、24、48、72h后，用MTT比色法檢測(cè)在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定各組光吸收值，檢測(cè)到在25μmol/L濃度H2O2作用24h時(shí)吸光度最大，顯示在25μ

3、mol/L濃度H2O2作用24h時(shí)，支氣管平滑肌細(xì)胞增殖最大。
　　2.分別用0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L濃度H2O2對(duì)支氣管平滑肌細(xì)胞作用24h，羅丹明123試劑處理后，激光共聚焦顯微鏡觀察到25μmol/L、50μmol/L H2O2處理組的熒光強(qiáng)度比0μmol/L H2O2處理組增強(qiáng)，100μmol/L、200μmol/L H2O2處理組的支氣管平滑肌細(xì)胞的熒光強(qiáng)

4、度逐漸減弱。其熒光值分別為(40.11±4.87)a.u、(50.02±3.82)a.u、(44.53±2.64) a.u、(25.23±3.52)a.u、(17.00±2.33)a.u，100～200μmol/L范圍內(nèi)，隨著是檢測(cè)時(shí)間增加，熒光值逐漸降低（q檢驗(yàn)，各組間P＜0.05）。
　　3.在25μmol/L、50μmol/L濃度H2O2對(duì)支氣管平滑肌細(xì)胞作用24h下，Mfn2蛋白的表達(dá)較0μmol/L濃度H2O2作用24h

5、低，以25μ mol/LH2O2作用24h后Mfn2蛋白的表達(dá)最低。
　　4.在25μmol/L、50μmol/L濃度H2O2對(duì)支氣管平滑肌細(xì)胞作用24h下，Mfn2mRNA的表達(dá)較0μmol/L濃度H2O2作用24h時(shí)低，以25μmol/L濃度H2O2作用24h后Mfn2 mRNA的表達(dá)最低，在100μmol/L、200μmol/L濃度H2O2作用24h下，Mfn2 mRNA的表達(dá)比0μmol/L濃度H2O2作用24h時(shí)高，且呈