2型糖尿病及其微血管并發(fā)癥患者血清microRNA表達譜篩選及臨床價值研究.pdf

1、目的:篩選2型糖尿?。═ype2 diabetes mellitus，T2DM）及其微血管并發(fā)癥(Type2 diabetes mellitus microvascular complications，T2DMC)患者特異變化血清微小核糖核酸(microRNA，miRNA)表達譜，評價其對T2DM及T2DMC的診斷、鑒別診斷和病情監(jiān)控臨床價值。
　　方法:收集2013年9月～2014年5月間南京軍區(qū)總院內分泌科收治的新發(fā)或一個月內

2、未經任何治療的T2DM及T2DMC各87例，同時收集同期在醫(yī)院體檢中心年齡、性別完全匹配的健康體檢者87例做為正常對照。首先采用高通量、高靈敏度的低密度芯片技術（TaqMan Low Density Array, TLDA）對T2DM、T2DMC及健康對照各25例樣本分別組成的混合血清中768種miRNA的表達水平進行檢測，初篩T2DM和T2DMC特異變化的一組血清miRNA;然后運用準確的實時熒光定量PCR技術(quantitativ

3、e real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)對初篩miRNA在TLDA所使用的同一批樣本中進行復篩（復篩組）;進一步運用qRT-PCR技術在另外三組T2DM、T2DMC和健康對照各62例樣本中對復篩結果進行驗證（驗證組），篩選T2DM及T2DMC患者血清中穩(wěn)定變化的一組miRNA。同時，運用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測

4、定全部患者及對照血清樣本中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、氧化脂蛋白(a)[ox-Lp(a)]、β2糖蛋白氧化低密度脂蛋白復合物(β2-GPI-ox-LDL)和β2糖蛋白脂蛋白(a)復合物[β2-GPI-Lp(a)]的水平，運用Spearman秩相關分析和邏輯回歸分析患者特異變化血清miRNA與上述脂蛋白、臨床指標相關性及是否為T2DM及T2DMC獨立危險因素。
　　結果:TLDA結果顯示，T2DM及T2DMC患者血清miRNA

5、表達譜與健康對照相比具有明顯差異，53種miRNA在T2DM及T2DMC患者血清中較對照組表達上升，117種miRNA在患者表達下降。結合TLDA初篩及文獻調查結果，我們選取了12種miRNA在復篩組樣本中進行復篩，發(fā)現(xiàn)8種miRNA，包括miR-571、miR-661、miR-1303、miR-152、miR-1323、miR-892b、miR-770-5p和miR-886-3p水平在兩組患者血清中顯著上升，其中在T2DMC患者中變化

6、更為顯著（變化倍數(shù)＞2，P＜0.05）;8種miRNA在驗證組中變化趨勢與復篩組一致（變化倍數(shù)＞2，P＜0.05）;ROC曲線分析顯示，8種血清miRNA對T2DM診斷的ROC曲線下面積(AUC)在0.774～0.877之間，對T2DMC診斷的ROC曲線下面積在0.823～0.946之間，對T2DM和T2DMC鑒別診斷的ROC曲線下面積在0.611～0.675之間。根據選定的cutoff值，8種血清miRNA對T2DM診斷的靈敏性和特異

7、性分別在68.2％～88.1％和63.0％～84.5％之間;對T2DMC診斷的靈敏性和特異性分別在64.8％～84.7％和80.6％～98.6％之間;進一步分析上述miRNA的鑒別診斷價值顯示，3種miRNA對T2DM和T2DMC的鑒別診斷具一定臨床價值，其AUC、靈敏性和特異性分別為:miR-886-3p(AUC=0.675，靈敏性=0.651，特異性=0.628)、miR-892b（AUC=0.639，靈敏性=0.662，特異性=0

8、.622）和miR-571(AUC=0.611，靈敏性=0.603，特異性=0.608)。ELISA結果顯示，T2DM和T2DMC患者ox-LDL、ox-Lp(a)、β2-GPI-ox-LDL、β2-GPI-Lp(a)水平亦顯著高于健康對照組（P均＜0.05）。Spearman秩相關分析顯示，T2DM和T2DMC患者變化的8種血清miRNA與空腹血糖(fasting blood-glucose，F(xiàn)PG)、ox-LDL、ox-Lp(a)呈

9、顯著正相關（P均＜0.05）。單因素邏輯回歸分析顯示，8種血清miRNA、氧化脂蛋白及其復合物均為預測T2DM和T2DMC患者發(fā)病的獨立危險因素;進一步多因素分析結果顯示，在排除性別、年齡等影響因素后，miR-770、miR-661和甘油三酯仍是兩組患者獨立危險因素。
　　結論:8種血清包括miR-571、miR-661、miR-1303、miR-152、miR-1323、miR-892b、miR-770-5p和miR-886-3