米諾環(huán)素對大鼠局灶性腦缺血再灌注后Caspase-12表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：本研究采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，觀察米諾環(huán)素對神經元凋亡、Caspase-12表達的影響。 方法：采用大腦中動脈線栓閉塞法(線栓法)制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，缺血60min后恢復再灌注24h。45只健康成年雄性Wistar大鼠(230±10)g，隨機分為假手術組(n=15)、缺血再灌注組(n=18)、米諾環(huán)素干預組(n=12)。取假手術組3只，缺血再灌注組6只，依據Zealonga神經功能評分及TTC染色結果判

2、斷造模是否成功；其余采用HE染色觀察腦組織病理學改變，DNA原位末端缺口標記法(TUNEL)檢測神經元凋亡，免疫組化法檢測Caspase-12蛋白表達，反轉錄聚合酶鏈反應法(RT—PCR)半定量檢測Caspase-12mRNA表達水平。 結果：1．假手術組大鼠未出現任何神經缺失癥狀；缺血再灌注組大鼠出現不同程度的神經功能缺損。TTC染色示假手術組腦組織呈紅色；缺血再灌注組梗塞蒼白區(qū)域位于額頂顳葉皮質及紋狀體外側部。造模成功。

3、 2．HE染色：假手術組神經元形態(tài)結構正常；缺血再灌注組缺血半暗帶(部分額葉皮層及紋狀體內側區(qū))及海馬CA1區(qū)腦組織結構變疏松，間質水腫有空腔形成，神經元數量減少，體積縮小，排列紊亂疏松，神經元核固縮，染色質邊集；米諾環(huán)素干預組缺血半暗帶區(qū)、CA1區(qū)結構完整的神經元明顯增多，和凋亡細胞交錯存在。 3．TUNEL檢測結果：假手術組僅有零星凋亡細胞分布；缺血再灌注組凋亡細胞顯著增多(P＜0.05)；與缺血再灌注組組比較，米諾環(huán)素

4、干預組凋亡細胞明顯減少，但高于假手術組(P＜0.05)。 4．免疫組化：假手術組Caspase-12蛋白微量表達；缺血再灌注組表達明顯增強(P＜0.05)，其表達的空間分布與TUNEL結果一致；與假手術組比較，米諾環(huán)素干預組Caspase-12表達亦有增強，但比缺血再灌注組表達減弱(P＜0.05)。 5．RT—PCR：假手術組Caspase-12mRNA呈低水平表達；缺血再灌注組表達增加(P＜0.05)；與缺血再灌注組比