量子點誘導Hela細胞凋亡分子機制的研究.pdf

1、研究目的:
　　1、通過研究硫化鋅包被硒化鎘量子點(CdSe/ZnS QDs)基本物理及光學特征,驗證其是否為一種適用于生物醫(yī)學的熒光染料。
　　2、通過檢測 CdSe/ZnS QDs及氯化鎘(CdCl2)對 Hela細胞活性及凋亡率的影響,探究 CdSe/ZnS QDs是否具有細胞毒性作用。
　　3、通過比較空白對照組、CdSe/ZnS QDs組及 CdCl2組 Hela細胞內(nèi) ROS產(chǎn)量,探究 CdSe/ZnS Q

2、Ds誘導 Hela細胞凋亡可能的機制。
　　4、通過對凋亡相關(guān)蛋白的檢測,進一步闡述 CdSe/ZnS QDs誘導細胞凋亡的機制。
　　方法:
　　本實驗采用透射電子顯微鏡(Transmission electron microscope,TEM)、紫外分光光度計(Ultraviolet spectrophotometer)及熒光光譜儀(Fluorescence spectrometer)對 CdSe/ZnS QDs進

3、行表征。透射電子顯微鏡用于了解 CdSe/ZnS QDs的大小、形狀、外觀均一程度,紫外分光光度計用于檢測 CdSe/ZnS QDs的吸收光波長范圍,熒光光度計用于檢測 CdSe/ZnS QDs所發(fā)射熒光波長范圍。
　　在建立穩(wěn)定 Hela傳代細胞株,通過 MTT實驗比較不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2孵育 Hela細胞24 h后細胞活性的改變,再通過流式細胞術(shù)比較不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2對

4、 Hela細胞凋亡率的影響。通過對比空白對照組、CdSe/ZnS QDs組及 CdCl2組 Hela細胞活性及凋亡率差異,初步判斷 CdSe CdSe/ZnS QDs是否具有細胞毒性。
　　通過 DCFH-DA熒光探針檢測不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2孵育 Hela細胞24 h后細胞內(nèi) ROS量,并比較不同組之間 ROS量的差異,探究 CdSe/ZnS QDs對 Hela細胞內(nèi) ROS量的影響。
　　最后通

5、過 Western blot檢測不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2孵育 Hela細胞24 h后細胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白 Bcl-2與 Bax表達量,對比不同組間 Bcl-2與 Bax蛋白表達量差異分析 CdSe/ZnS QDs對細胞內(nèi) Bcl-2與 Bax蛋白表達的影響并分析其可能的原因。
　　結(jié)果:
　　1、本實驗所用 CdSe/ZnS QDs顆粒均勻呈球形,直徑小,具有良好的單分散性和晶體結(jié)構(gòu),激發(fā)光譜寬,發(fā)射光

6、譜連續(xù)且對稱。
　　2、CdSe/ZnS QDs對 Hela細胞的毒性作用遠強于 CdCl2,且其細胞毒性作用與給藥濃度呈正比。
　　3、 CdSe/ZnS QDs較 CdCl2誘導 Hela內(nèi)產(chǎn)生更多的 ROS,且 CdSe QDs/ZnS對 ROS的誘導效應(yīng)與給藥濃度成正比。
　　4、CdSe/ZnS QDs較 CdCl2誘導 Hela細胞凋亡效應(yīng)更強,且其誘導凋亡效應(yīng)與給藥濃度成正比。
　　5、CdSe/Z

7、nS QDs處理組細胞內(nèi) Bcl-2蛋白表達量較空白對照組及相應(yīng)CdCl2處理組少,而 Bax蛋白表達較空白對照組及相應(yīng) CdCl2處理組多。
　　結(jié)論:
　　1、CdSe/ZnS QDs直徑小,光學特性優(yōu),適用于生物醫(yī)學研究。
　　2、CdSe/ZnS QDs具有細胞毒性作用,其毒性作用強于 CdCl2,且毒性作用與給藥濃度成正比。
　　3、CdSe/ZnS QDs能通過促進細胞內(nèi) ROS生成而誘導 Hela細