ABCC11基因SNP在腋臭發(fā)病中作用機制的研究及臨床應(yīng)用的探索.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、腋臭,俗稱狐臭,是一種常見疾病,臨床表現(xiàn)為雙側(cè)腋部難聞的氣味,患者多有家族史。雖其本身不對機體健康造成直接損害,但其散發(fā)出的難聞氣味,給患者帶來很大自卑感及心理負擔,影響人際交往及日常生活。因此,患者往往不斷尋求診治,且多要求徹底祛除。目前腋臭的治療方法種類繁多,可分為保守治療和手術(shù)治療。保守治療有效時間相對較短,一般難以達到徹底根治。手術(shù)治療仍是目前祛除腋臭最為徹底的方法。但是手術(shù)治療痛苦相對較大,還可能出現(xiàn)難以接受的并發(fā)癥。因此,尋

2、求一種療效持久,痛苦少,并發(fā)癥少,為大家公認的方法仍需要不斷的研究和嘗試。
  但是,臨床上對腋臭的診斷和治療存在著以下瓶頸:首先,腋臭癥的確切發(fā)病機制尚不明確。一般認為特殊異味的產(chǎn)生來自于腋窩部的頂泌汗腺。其分泌物質(zhì)經(jīng)皮膚表面的細菌作用,分解為多種不飽和脂肪酸,從而產(chǎn)生特殊的氣味。但是其具體分子機制及典型的常染色體顯性遺傳性未得到良好的解釋。因此,對腋臭遺傳基礎(chǔ)的進一步研究有助于揭示其發(fā)病機制并為腋臭的治療提供新方向。其次,目前

3、在臨床上,腋臭的診斷仍主要根據(jù)患者腋部特殊異味的主觀感覺判斷,仍缺乏客觀可靠的指標。特別是對腋臭較輕以及術(shù)后異味殘留的患者,僅憑氣味判斷嚴重程度有時存在一定的爭議。再次,腋臭的嚴重程度及療效評價標準尚不統(tǒng)一,以至于各種治療方法難以進行科學(xué)有效的比較研究。因此,腋臭發(fā)病機制的進一步研究對尋找腋臭客觀的診斷及評價指標、指導(dǎo)腋臭的治療及相關(guān)治療藥物的研發(fā)均具有重要的臨床意義和價值。
  目的:
  1.分析ABCC11基因單核苷酸

4、多態(tài)性與腋臭發(fā)病的相關(guān)性,分析不同基因型與腋臭的嚴重程度的關(guān)系;
  2.研究腋窩頂泌汗腺中ABCC11基因編碼蛋白在腋臭患者與正常人的表達差異,進一步探討ABCC11單核苷酸多態(tài)性在腋臭發(fā)病中的作用機制。
  3.人頂泌汗腺細胞體外模型的建立,培養(yǎng)并觀察腺細胞的生長特性,分析ABCC11基因不同基因型頂泌汗腺細胞的生長及增殖差異,為進一步的研究打下基礎(chǔ)。
  4.檢測不同基因型人頂泌汗腺中ABCC11/MRP8及Ap

5、oD蛋白表達及轉(zhuǎn)錄水平,分析二種蛋白的相關(guān)性,進一步揭示腋臭的發(fā)病機制,也為尋找腋臭的臨床診斷及療效評價的客觀指標提供新方向。
  5.采用負壓剝離結(jié)合消痔靈灌注的新方法治療腋臭,隨訪觀察治療效果及并發(fā)癥,結(jié)合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表達水平的檢測評價手術(shù)效果,分析基因型、腋臭嚴重程度、療效及預(yù)后的關(guān)系。為腋臭的診斷評價指標及腋臭的手術(shù)治療方法的改進提供理論依據(jù)。
  方法:
  1.取正常成人及腋臭患者外

6、周血液以提取DNA,應(yīng)用聚合酶鏈式反應(yīng)-高分辨率溶解曲線(PCR-HRM)技術(shù),結(jié)合測序驗證檢測ABCC11基因多態(tài)性位點rs17822931的基因型,分析不同等位基因在腋臭患者及正常人群中的分布情況,探討其與中國漢族人群腋臭發(fā)病的相關(guān)性。
  2.建立人頂泌汗腺細胞體外模型,觀察不同基因型人頂泌汗腺細胞的生長特性并繪制生長曲線,分析不同基因型對人頂泌汗腺細胞增殖能力的影響。
  3.隨機收取不同基因型的受試者腋窩全層皮膚標

7、本,采用組織切片觀察頂泌汗腺的形態(tài),采用免疫組織化學(xué)、realtime-PCR及western-blotting技術(shù)檢測不同基因型腋窩頂泌汗腺組織中ABCC11/MRP8及ApoD蛋白的表達和轉(zhuǎn)錄水平,采用SPSS13.00軟件進行統(tǒng)計,分析兩種蛋白水平之間的相關(guān)性及與腋臭程度的關(guān)系,分析二種蛋白表達水平在不同基因型組間是否存在差異,P<0.05認為有統(tǒng)計學(xué)意義。
  4.收集于湘雅醫(yī)院整形美容外科門診行負壓剝離結(jié)合消痔靈灌注祛除

8、腋臭患者的一般情況及相關(guān)臨床資料,隨訪觀察并記錄治療效果及并發(fā)癥,與其他報道的方法進行對比分析,評價該治療方法的效果,為手術(shù)方法的進一步改進提供理論基礎(chǔ);結(jié)合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表達水平的檢測分析評價手術(shù)效果,為尋找手術(shù)后療效評價的客觀參考指標提供理論依據(jù)。
  結(jié)果:
  1.ABCC11基因多態(tài)性位點rs17822931存在三種基因型:G/G、A/G、A/A,在52個病例組中頻率分別為9.62%、88.4

9、6%、1.92%;在52例對照組均為AA型;98.08%的腋臭患者存在G型等位基因,說明該位點的G型等位基因是腋臭的發(fā)生的顯性遺傳因素。不同基因型之間腋臭的嚴重程度存在差異且有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.035<0.05);
  2.收集腋窩全層皮膚標本58例,其中AA型的正常人8例,不同程度的腋臭患者50例(GG型5例,GA型45例);免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示ABCC11及ApoD蛋白均特異性的在人腋窩頂泌汗腺細胞中表達。不同程度的腋臭

10、患者腋窩皮膚中兩種蛋白的表達水平存在差異;ABCC11/MRP8蛋白表達陽性率的秩和檢驗分析顯示GG型及GA型的腋臭患者腋窩頂泌汗腺中的ABCC11/MRP8陽性率明顯高于基因型為AA型的正常人;但GG型與GA型的ABCC11/MRP8陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
  3.光鏡下觀察腋窩皮膚組織切片樣本顯示:基因型為GG及GA型的腋臭患者的頂泌汗腺數(shù)量及處在分泌活躍期的頂泌汗腺比例均明顯高于基因型為AA型的正常人。GG型及GA型之間無

11、顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。
  4.頂泌汗腺細胞培養(yǎng)觀察表明不同基因型的細胞具有共同特征:培養(yǎng)潛伏期為1-2天;3天后細胞增殖活躍,進入對數(shù)增殖期,細胞呈‘鵝卵石’樣,體積較大、透明度好;對數(shù)增殖期持續(xù)約10-12天,直至第7天達峰值,第12天各基因型的人頂泌汗腺細胞增殖受到不同程度的抑制。通過繪制生長曲線并分析比較,顯示GG型及GA型人頂泌汗腺細胞在第6天、第9天,第12天的細胞數(shù)量明顯多于AA型,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
  5.免

12、疫組織化學(xué)、Western blotting及PCR檢測結(jié)果顯示腋臭患者腋窩頂泌汗腺中的ABCC11和ApoD表達及轉(zhuǎn)錄水平均明顯高于正常人,ABCC11的基因型與其mRNA及蛋白水平存在相關(guān)性。ABCC11與ApoD蛋白的水平相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)。
  6.收集并隨訪從2009年3月至2013年3月于湘雅醫(yī)院整形美容外科門診行負壓剝離結(jié)合消痔靈灌注祛除腋臭的患者171名,其中重度63例,中度81例,輕度27例,隨訪6個月至

13、26個月。隨訪顯示治愈316側(cè),占92.4%;有效26側(cè),約占7.6%,有效率100%;滿意度調(diào)查顯示,157例患者對手術(shù)效果表示非常滿意(91.8%),13例患者表示基本滿意(占7.6%),滿意度達99.4%。與已有各種腋臭治療手術(shù)方法比較,認為該手術(shù)方法滿意度相對較高,并發(fā)癥發(fā)生率相對較低。
  7.手術(shù)前后腋窩皮膚Western blotting及PCR結(jié)果顯示術(shù)后ABCC11/MRP8和ApoD表達明顯減少或無表達。不同嚴

14、重程度與治愈率檢驗分析顯示:中度及輕度患者的治愈率相對重度較高,有統(tǒng)計學(xué)意義;
  結(jié)論:
  1.ABCC11基因rs17822931位點單核苷酸多態(tài)性是腋臭形成的重要遺傳因素,G型等位基因的存在是腋臭發(fā)生的遺傳基礎(chǔ);該基因在腋窩大汗腺中特異性的表達,其表達水平在不同基因型存在差異,影響腋臭的嚴重程度。ABCC11基因rs17822931位點單核苷酸多態(tài)性基因型的檢測可作為臨床上客觀診斷及評價腋臭的參考依據(jù)之一;
 

15、 2.ABCC11不同基因型的頂泌汗腺內(nèi)蛋白表達水平及mRNA水平存在差異,該基因可能是通過調(diào)控轉(zhuǎn)運多種脂類腋臭前體物質(zhì)的蛋白量,直接影響臭味物質(zhì)的分泌,從而決定腋臭的發(fā)生。
  3.不同腋臭嚴重程度頂泌汗腺ABCC11/MRP8及ApoD的表達水平不同,術(shù)后兩種蛋白的水平明顯減少,兩種蛋白的表達水平呈正相關(guān),但相關(guān)性較弱。ABCC11/MRP8及ApoD檢測有助于腋臭的診斷及療效評判。
  4.ABCC11基因單核苷酸位點

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