大豆7S、11S蛋白酶解模擬分析及疏水性對(duì)抗氧化活性的影響.pdf

1、本文研究了“活性肽搜尋與蛋白模擬酶解”程序?qū)Φ鞍踪|(zhì)的模擬酶解與實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性，并利用大孔吸附樹脂的分級(jí)技術(shù)分析水解產(chǎn)物疏水性與抗氧化活性的關(guān)系，最后經(jīng)凝膠過濾層析、反相高效液相色譜及液相-質(zhì)譜聯(lián)用獲得了具有較強(qiáng)抗氧化活性的組分序列，進(jìn)一步討論了模擬酶解預(yù)測抗氧化肽的可行性及疏水性對(duì)肽的抗氧化活性的影響。論文主要研究結(jié)論如下：
　　 以“活性肽搜尋與蛋白模擬酶解”程序?yàn)楣ぞ?，?duì)大豆7S、11S蛋白進(jìn)行模擬酶解，根據(jù)實(shí)驗(yàn)酶解產(chǎn)物分

2、子量分布對(duì)模擬結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果表明：堿性蛋白酶Alcalase和中性蛋白酶酶解產(chǎn)物水解度較高(DH＞30％)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與模擬酶解所得片段分子量分布在重均分子量上線性關(guān)系顯著(P＜0.01)，相關(guān)性較好(r=0.979～0.999)；胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解產(chǎn)物因水解度較低(DH＜20％)，與模擬結(jié)果存在一定差異。
　　 采用DA201-C型大孔吸附樹脂對(duì)7S堿性蛋白酶水解產(chǎn)物進(jìn)行吸附，以不同濃度乙醇進(jìn)行梯度洗脫，測定各洗脫

3、組分的氨基酸組成和抗氧化活性，并計(jì)算平均疏水性Q值。結(jié)果顯示：組分平均疏水性Q值隨著乙醇濃度的提高而升高；DPPH·自由基清除能力、Fe2+螯合能力以及亞油酸過氧化抑制能力與平均疏水性呈顯著正相關(guān)(P＜0.01～0.05)，還原力與平均疏水性相關(guān)性不顯著(P＞0.05)。
　　 利用Sephadex G-15凝膠過濾層析、半制備RP-HPLC對(duì)水解物進(jìn)行分離純化，經(jīng)LC-MS鑒定得到12個(gè)氨基酸序列，分別為GCGF、QPEN、Y

4、GALQ、NP、EGTNNP、YGSL、VPAGCT、EGAF、AY、LLYA/LIYA/ⅡYA/PEYA、WIY/WLY和WF，其中9條序列在大豆7S蛋白序列中找到相同或相似的片段，1條序列為已證實(shí)的抗氧化肽，數(shù)條序列與已知抗氧化肽有著類似結(jié)構(gòu)或氨基酸組成，說明模擬酶解蛋白分析預(yù)測抗氧化肽具有一定的可行性。通過計(jì)算12個(gè)肽段的疏水性Q值并比較其抗氧化活性，結(jié)果表明亞油酸過氧化抑制能力與其疏水性Q值呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)，疏水性Q