基因工程內(nèi)皮祖細胞介導的靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分：CD133免疫磁珠分選臍血內(nèi)皮祖細胞的培養(yǎng)及鑒定 目的:建立具備高效增殖、血管生成與遷移能力的臍血內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)分離培養(yǎng)鑒定方法。 方法:應用免疫磁珠分選純化臍血單個核細胞中的CD133+細胞，體外EGM-2MV培養(yǎng)液培養(yǎng)擴增，通過形態(tài)學、細胞表面標志及功能鑒定EPCs，并與臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothe

2、lial cells，HUVECs)作比較. 結(jié)論:通過CD133免疫磁殊分選臍血單個核細胞，可培養(yǎng)出具有高效增殖、血管生成與遷移能力的EPCs。 第二部分：膠質(zhì)瘤誘導內(nèi)皮祖細胞血管新生的機制初探　 目的:初步探討內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)參與膠質(zhì)瘤血管新生的機制。 方法:通過U87膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)上清作用于EPCs，觀察EPCs體外血管形成以及遷移能力

3、，并檢測VEGFR-1、VEGFR-2與MMP-9的表達。VEGFR-2 siRNA轉(zhuǎn)染EPCs，觀察對EPCs參與血管新生的影響，檢測VEGFR-2、MMP-9、Akt和ERK的表達。 結(jié)論:膠質(zhì)瘤細胞通過上調(diào)EPCs VEGFR-2調(diào)控MMP-9、Akt和ERK的表達，從而誘導EPCs參與其血管新生。 第三部分：HSV-TK轉(zhuǎn)染的內(nèi)皮祖細胞的靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤體內(nèi)外實驗 目的:以內(nèi)皮祖細胞(endothe

4、lial progenitor cells，EPCs)為載體，探討轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs，靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤體內(nèi)外治療作用。 方法:重組腺病毒Ad.CMV-tk轉(zhuǎn)染EPCs后，經(jīng)GCV作用，觀察其敏感性；將轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs和U87與U251膠質(zhì)瘤細胞、臍靜脈內(nèi)皮細胞，以不同比例混合，經(jīng)GCV作用，以MTT法檢測細胞存活率，流式細胞儀檢測凋亡。將轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs經(jīng)尾靜脈注入裸鼠皮下膠質(zhì)瘤模型，觀察各組腫

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