N3-鄰甲苯甲?；?氟脲嘧啶（TFU）抗腫瘤作用及機(jī)制研究.pdf

1、N3-鄰甲苯甲?；?氟脲嘧啶(N3-o-toluyl-fluorouracil，TFU)是N1-乙?；3-鄰甲苯甲?；?氟脲嘧啶(ATFU，阿托氟啶)降解的次級(jí)化合物和5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)前體化合物。本研究觀察了TFU在體內(nèi)外的抗腫瘤作用及其部分作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法：觀察TFU抗腫瘤活性，(1)以MTT法分別觀察了TFU對(duì)2種人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，并在肝微粒體酶存在條件下，檢測(cè)了其提高T

2、FU對(duì)人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用。(2)以小鼠移植性腫瘤實(shí)驗(yàn)法，觀察TFU對(duì)體內(nèi)生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞抑制作用。(3)以裸鼠移植人胃腺癌細(xì)胞，觀察對(duì)人腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。在研究TFU誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)方面，(1)吖啶橙/溴乙錠(AO/EB)染色法，觀察TFU與腫瘤細(xì)胞直接接觸，引起細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。(2)瓊脂糖凝膠電泳分析腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生DNAladder。(3)以流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)亞二倍體峰及其凋亡細(xì)胞率。(4)TUNEL染色實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)

3、裸鼠移植人胃癌組織細(xì)胞的凋亡水平。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在0.1μg/ml-1000μg/ml范圍內(nèi)，TFU對(duì)人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901和NKM-45生長(zhǎng)有一定的抑制作用。但是，抑制作用較弱，1000μg/ml濃度，連續(xù)用藥120h，抑制率不超過(guò)50﹪。在肝微粒體酶存在條件下，能較大程度地提高對(duì)上述2種細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率，對(duì)SGC-7901細(xì)胞抑制率提高29.24﹪～42.57﹪；對(duì)NKM-45細(xì)胞抑制率提高53.98﹪～66.19﹪。T

4、FU對(duì)小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌H22有明顯的抑制生長(zhǎng)作用。分別以50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg灌胃給藥12～15d，對(duì)S180腫瘤的抑制率為41.81﹪，55.45﹪和59.55﹪，對(duì)H22腫瘤的抑制率為39.77﹪，64.09﹪和87.65﹪。對(duì)H22小鼠肝癌抑制率分別為39.77﹪，64.09﹪和87.65﹪。但是，200mg/kg劑量組小鼠體重明顯下降。分別將SGC-7901和NKM-45細(xì)胞移植裸鼠體內(nèi)，以

5、50mg/kg，100mg/kg，150mg/kg灌胃給藥3周，對(duì)2種抑制性人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)也有很強(qiáng)的抑制作用。對(duì)SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為43.55﹪，60.30﹪和71.07﹪；對(duì)NKM-45細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為33.21﹪，47.96﹪和60.44﹪。 TFU誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，分別以0.1μg/ml，1μg/ml，5μg/ml，10μg/ml和50μg/ml處理細(xì)胞10h，AO/EB染色可見(jiàn)典型細(xì)胞凋亡特征，2種細(xì)

6、胞均出現(xiàn)凋亡小體，細(xì)胞膜皺縮等。瓊脂糖凝膠電泳分析可見(jiàn)典型DNA遷移的梯形特征。流式細(xì)胞儀分析MKN-45細(xì)胞，可見(jiàn)DNA亞二倍體峰。0.1μg/ml，1μg/ml，5μg/ml，10μg/ml和50μg/ml處理細(xì)胞10h，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率分別為5.29﹪，12.52﹪，20.17﹪，42.76﹪和61.90﹪。TUNEL染色方法觀察裸鼠移植人胃癌細(xì)胞凋亡水平，25mg/kg，50mg/kg和150mg/kg給藥三周，對(duì)裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的S