阿奇霉素在結(jié)核性胸膜炎中的免疫糾偏作用研究.pdf

1、目的：研究阿奇霉素對結(jié)核性胸腔積液中淋巴細胞表達細胞因子（IFN—γ、TGF—α、IL—4、IL—12）功能的影響，探討阿奇霉素在結(jié)核病中可能的免疫糾偏作用。 方法：以診斷明確的結(jié)核性胸膜炎患者為研究對象；無菌術收集胸腔積液，上清液凍存?zhèn)溆茫匀肆馨图毎蛛x液及貼壁培養(yǎng)方法分離其中細胞；CD4單克隆抗體孵育提純細胞后經(jīng)免疫細胞化學染色驗證所得細胞類型；并將分離細胞以0．1%臺盼藍染色活細胞計數(shù)，調(diào)細胞濃度為1×106/ml，設陰

2、性對照組（不施加藥物干預）、陽性對照組（給予不同濃度多抗甲素干預）、試驗組（以不同濃度阿奇霉素干預），接種于12孔板（含10%胎牛血清、100mg/L植物血凝素的完整RPMI1640培養(yǎng)基），其中，陰性對照組設5個復孔，陽性對照組和試驗組分別按同一濃度組設5個復孔，置37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)；各培養(yǎng)孔內(nèi)均不更換培養(yǎng)基，分別于12、24、48、72小時離心，取培養(yǎng)液及細胞沉渣備用；抽提總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈式反應法（revers

3、e transcription—polymerase chain reaction，RT—PCR）觀察不同干預下各階段γ—干擾素（interferon—gamma，IFN—γ）、細胞轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor—beta，TGF—β）、白細胞介素—4（interleukin—4，IL—4）、白細胞介素—12（interleukin—12，IL—12）mRNA表達水平；同步用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzy

4、me linked immunosorbent assay，ELISA）檢測不同階段各組上清液及培養(yǎng)液內(nèi)IFN—γ、TGF—β、IL—4、IL—12濃度。 結(jié)果：以CD4單克隆抗體孵育結(jié)核性胸腔積液中分離細胞經(jīng)免疫化學染色，明顯呈棕色反應，提示CD4+T淋巴細胞陽性率為74．73%。目的基因擴增電泳條帶灰度掃描結(jié)果顯示，試驗組IFN—γ、IL—12 mRNA表達上調(diào)，TGF—β、IL—4mRNA表達下調(diào)，與陰性對照組相比有統(tǒng)計學

5、差異（P<0．05），與陽性對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0．05）。ELISA檢測結(jié)果與RT—PCR分析結(jié)果基本一致，呈同向變化，即試驗組IFN—γ、IL—12濃度增加，TGF—β、IL—4濃度減少，與陰性對照組有統(tǒng)計學差異（P<0．05），與陽性對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0．05）。并且，前述結(jié)果呈現(xiàn)一定時間以及劑量依賴性，即隨阿奇霉素濃度增加、作用時間延長，IFN—γ、IL—12表達上調(diào)，及TGF—β、IL—4表達下調(diào)逐漸顯著；以