重組腺病毒(Ad-GFP)感染胚胎大鼠神經干細胞及耳蝸移植的實驗研究.pdf

1、華中科技大學博士學位論文重組腺病毒（AdGFP）感染胚胎大鼠神經干細胞及耳蝸移植的實驗研究姓名：付勇申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科指導教師：龔樹生20070501華中科技大學博士學位論文華中科技大學博士學位論文第二部分第二部分胚胎大鼠神經干細胞的冷凍及復蘇胚胎大鼠神經干細胞的冷凍及復蘇目的目的研究胚胎大鼠神經干細胞（NeuralstemcellsNSCs）凍存復蘇后的成活率及再培養(yǎng)生長情況，觀察低溫凍存對NSCs生物特性的影響。方法

2、方法含有10%BSA及7.5%DMSO的NSCs無血清培養(yǎng)液(不含神經生長因子)作為凍存液，將利用無血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)的原代、第三代、第六代胚胎大鼠NSCs進行凍存，于1周、4周、8周、12周、16分別復蘇，計數(shù)活細胞比例并進行再培養(yǎng)、分化鑒定。結果結果不同的細胞代數(shù)，不同的凍存時間對復蘇后的細胞存活率都無明顯影響。復蘇后NSCs的成活率均達到60％－70％，并能分化為神經元和星型膠質細胞。結論結論本實驗成功地對胚胎大鼠NSCs進行了凍

3、存復蘇及再培養(yǎng)，為擇期應用NSCs移植治療中樞神經系統(tǒng)疾病的實驗研究奠定了基礎。關鍵詞：關鍵詞：神經干細胞胚胎凍存復蘇第三部分第三部分攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒構建及鑒定攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒構建及鑒定目的目的構建攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒，為神經干細胞（NeuralstemcellsNSCs）的基因轉染實驗提供條件。方法方法利用腺病毒細菌內同源重組方法構建攜帶綠色熒光蛋白（greenfluescentprotei

4、nGFP）基因的復制缺陷型重組腺病毒AdGFP，通過反復感染大量擴增病毒后，測定病毒的滴度，80℃保存?zhèn)溆?。結果結果重組質粒經限制性內切酶酶切電泳證明重組成功；重組質粒轉染293細胞后，隨時間變化表達綠色熒光的細胞數(shù)目逐漸增多，熒光強度也逐漸增強；通過反復感染大量擴增病毒后，檢測病毒滴度約為5109PFUml。結論結論本試驗通過細菌內同源重組方法，成功地構建了攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒（AdGFP）為下一步NSCs的體外基因感染研