九節(jié)龍皂苷Ⅰ對多種人腦膠質瘤細胞系自噬活性增強作用的體外研究.pdf

1、目的：
　　探討九節(jié)龍皂苷Ⅰ（Ardipusilloside I，ADSⅠ）對多種人腦膠質瘤細胞系自噬活性的增強作用。
　　方法：
　　培養(yǎng)人腦膠質瘤U87MG、U251MG、U373MG、SHG-44MG細胞系，隨機分為二甲基亞砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO）對照組和ADSⅠ治療組。采用甲基噻唑基四唑法（Methyl thiagolyl tetragolium，MTT）檢測不同劑量ADSⅠ對四種典

2、型人膠質瘤增殖的影響；透射電鏡（Transmission electron microscopy，TEM）觀察四種典型人腦膠質瘤細胞超微結構的形態(tài)學變化；免疫細胞化學法檢測自噬相關蛋白Beclin-1、LC-3的表達變化；Western blot檢測自噬相關蛋白Beclin-1、LC-3的表達水，流式細胞術（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測ADSⅠ對U373MG細胞周期和凋亡的作用；自噬抑制劑氯喹（Chloroquine，CQ

3、）對ADSⅠ介導的U373MG細胞自噬活性的作用。
　　結果：
　　MTT法檢測顯示：ADSⅠ可明顯抑制四種典型人腦膠質瘤細胞的生長，呈現(xiàn)時間-劑量依賴性。TEM可以觀察到細胞形態(tài)學上的典型自噬小體特征，包括成核、自噬體形成等。免疫細胞化學結果顯示：ADSⅠ作用于四種典型人腦膠質瘤細胞24 h后，自噬相關蛋白Beclin-1、LC-3均在胞漿中高表達，并隨ADSⅠ藥物濃度的增加，自噬相關蛋白Beclin-1、LC-3陽性細胞

4、率也隨之增高。Western-blot結果提示：ADSⅠ能增強四種典型人腦膠質瘤細胞中的自噬相關蛋白Beclin-1、LC-3的表達水平，并且隨ADSⅠ藥物濃度增加，表達增高；FCM結果表明，3.8 mg/L的ADSⅠ顯著阻滯U373MG細胞周期的G2/M相，低高濃度ADSⅠ顯著提高U373MG的凋亡和壞死細胞術；自噬抑制實驗表明，CQ可以顯著減弱ADSⅠ對U373MG細胞存活率的抑制作用。
　　結論：
　　ADSⅠ能夠抑制