姜黃素對氧化損傷的小鼠腦神經(jīng)瘤細胞的保護作用研究.pdf

1、活性氧誘導的氧化應激已被證實與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理密切相關。姜黃素是一種從姜科植物中提取的天然多酚類抗氧化物質。目前國內(nèi)外關于姜黃素對氧化損傷神經(jīng)元細胞的保護作用的報道比較少，其作用機理，尤其是細胞水平的機理也不是很清楚。在本研究中，利用H2O2誘導氧化損傷的小鼠腦神經(jīng)瘤細胞Neuro-2A模型探討姜黃素的神經(jīng)保護作用及其機理。
　　 將Neuro-2A細胞接種到細胞培養(yǎng)板中,37℃培養(yǎng)過夜，不同濃度姜黃素預孵育1 h，繼而

2、30 μmol/L H2O2 作用24 h。細胞存活率的測定采用MTT法，結果顯示25 μg/ml姜黃素預孵育1 h可使30 μmol/L H2O2 處理24 h后的細胞存活率提高8.5％；細胞凋亡的檢測使用核染色法，結果顯示姜黃素可顯著抑制H2O2 誘導的Neuro-2A細胞凋亡，姜黃素預孵育1 h可使細胞凋亡率下降15.1％；細胞內(nèi)總抗氧化能力的測定采用比色法，結果顯示25 μg/ml姜黃素能夠使細胞內(nèi)總抗氧化能力提高15.9％。應

3、用流式細胞術研究細胞內(nèi)ROS堆積、線粒體跨膜電位崩塌以及胞外鈣離子內(nèi)流情況，結果顯示姜黃素能夠抑制細胞內(nèi)ROS過量生成和胞外鈣離子內(nèi)流，同時可使羅丹明123陰性細胞數(shù)比例降低11.81％，即有助于維持正常的線粒體跨膜電位；抗凋亡蛋白表達水平的檢測采用Western blot法，結果顯示預孵育25 μg/ml姜黃素1 h可提高抗凋亡蛋白PARP和 Bcl-2的表達量，與H2O2 處理組相比，這兩種蛋白在細胞內(nèi)的含量分別提高了12.1％和1

4、2.0％；Western blot法與胞漿/胞核蛋白分離法結合用來檢測細胞內(nèi)與凋亡及炎癥反應相關的NF-κB信號通路的激活情況，發(fā)現(xiàn)姜黃素能夠抑制H2O2引起的IκBα降解，進而阻止NF-κB激活，因此抑制其下游目的基因COX-2的表達，與H2O2 處理組相比,25 μg/ml姜黃素預孵育1 h可使細胞內(nèi)IκBα含量提高34.3％，抑制NF-κB活化及進入細胞核，進而使得炎癥因子COX-2表達量降低31.0％。
　　 總而言之，