認知障礙對大鼠炎癥性疼痛的影響.pdf

1、目的：臨床醫(yī)學調查顯示，癡呆病人對疼痛的感覺可能與常人不同。由于癡呆病人存在認知障礙，臨床上難以對其程度進行量化和準確評估，這導致臨床上忽視或沒有正確的治療癡呆病人的疼痛及相關病癥，加重了癡呆病人的抑郁程度和睡眠紊亂，進一步使癡呆病人的病情加重，照顧者負擔加重。本課題擬從基礎研究的角度揭示認知障礙和疼痛之間存在的客觀聯(lián)系，為臨床制定客觀、完善、準確的反映癡呆病人疼痛的評估方法提供客觀的依據(jù)和指導。
　　 方法：
　　 1

2、.通過將Aβ1-40/1-42混合溶液(10 μg/5 μl)注入到雙側海馬的CA1區(qū)來構造類似AD動物模型的大鼠認知障礙模型。
　　 2.應用行為學方法評價動物運動功能。
　　 3.利用Morris水迷宮篩選出認知存在障礙的動物。
　　 4.向篩選出的大鼠右側脛跗關節(jié)注射50μl完全弗氏佐劑(CFA)以誘發(fā)炎癥性疼痛模型，并進行熱刺激痛閾值和機械刺激痛覺閾值的測定。
　　 5.為進一步驗證認知障礙(老年

3、性癡呆)與疼痛之間的關系，本研究先采用CFA佐劑注射到大鼠的右側脛跗關節(jié)以誘發(fā)炎癥性疼痛動物模型。
　　 6.將放線菌酮(一種蛋白合成阻斷劑)注入大鼠雙側海馬的CA1區(qū)來干擾CFA對大鼠已經(jīng)造成的疼痛記憶。
　　 7.利用Morris水迷宮對動物的記憶水平進行評估。同時，對經(jīng)過相同手術處理的另兩組動物進行熱刺激痛閾值和機械刺激痛覺閾值的測定。
　　 8.檢測海馬及腰椎脊髓中Ab、膽堿乙酰轉移酶ChaT、N-甲基-

4、D-天冬氨酸受體NMDAR1、蛋白激酶PKCγ的表達:通過免疫組織化學方法檢測各組大鼠海馬及脊髓中Ab、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表達情況。
　　 9.檢測海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核和腰椎脊髓中Ab、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表達:通過Western Blot方法檢測各組大鼠海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核和腰椎脊髓中Ab、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表達情況。
　　 結果：
　　 1.在

5、整個試驗過程中，所有經(jīng)歷過手術的動物都能正常行走并擁有健康的步態(tài)。
　　 2.在Morris水迷宮實驗中，AD模型組動物的逃避潛伏期明顯比Na?ve組、ACSF組長。
　　 3.注射過CFA的大鼠右足和未注射CFA的相比，其熱痛閾值和機械痛覺閾值明顯減小，但AD/CFA組和AD/Veh組之間、ACSF/CFA組和AD/CFA組之間具有顯著性差異。
　　 4.Morris水迷宮結果表明放線菌酮組動物的逃避潛伏期明顯

6、比生理鹽水組動物的長。
　　 5.放線菌酮組與生理鹽水組相比，放線菌酮組動物的熱痛閾值和機械痛覺閾值明顯增加。
　　 6.免疫組織化學結果：AD模型組動物海馬中檢測出Ab沉積明顯增多，而Na?ve組和ACSF組動物的海馬中幾乎檢測不到Aβ的沉積。AD模型組動物的海馬中ChaT的表達和其他組動物的相比，明顯減少。全部CFA佐劑組與Na?ve組、vehcile組相比，CFA佐劑注射組動物的海馬及腰椎脊髓中NMDAR1的表達明

7、顯增加。AD/CFA組和ACSF/CFA組相比，前組動物NMDAR1的表達量略有減少。全部CFA佐劑注射組動物的海馬中PKCγ的表達與對照組相比顯著增加，ACSF/CFA組動物的海馬中PKCγ的表達與AD/CFA組相比增加更為顯著。
　　 7.Western Blot結果：Aβ在AD模型組動物中的表達與Na?ve、ACSF兩組相比，Western Blot的結果和免疫組織化學的結果基本保持一致。與Na?ve、全部ACSF組相比，

8、ChaT在全部AD模型組動物的對側、同側海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核的表達都出現(xiàn)明顯的下調。NMDAR1在ACSF/CFA、AD/CFA兩組動物的對側、同側海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核的表達與在它們各自相應的對照組相比，其表達量明顯上調。但是，NMDAR1在AD/CFA組的表達與ACSF/CFA組相比，表達量略有減少。PKCγ在ACSF/CFA、AD/CFA兩組動物的對側、同側海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核的表達與它們各自的對照組相

9、比較，其表達量顯著增加。但是，PKCγ在AD/CFA組的表達明顯少于ACSF/CFA組。
　　 結論：
　　 1.認知障礙與大鼠疼痛反應存在緊密的關聯(lián)，認知障礙的動物對疼痛的熱刺激與機械刺激較不敏感。
　　 2.放線菌酮注射造模，能明顯干擾動物的空間記憶鞏固過程，此種認知存在缺損的動物對疼痛的熱刺激和機械刺激與對照組動物相比，痛覺表現(xiàn)不明顯。
　　 3.本研究的結果提示，存在認知障礙的動物在炎癥性疼痛的刺