探索學(xué)習(xí)對局灶性腦梗死大鼠行為學(xué)恢復(fù)及巢蛋白、神經(jīng)生長因子、突觸素表達的影響.pdf

1、目的：腦血管意外是一類發(fā)病率、死亡率和致殘率都很高的疾病，在中國，腦血管意外的致殘率在眾多疾病中居于首位，其發(fā)展快、恢復(fù)慢和高死亡率、致殘率的特點，給患者和家庭、社會帶來了極大的痛苦和沉重負擔(dān)。有研究表明，康復(fù)治療對缺血性腦梗死的患者在改善感覺、運動及行為能力方面已獲得明顯的療效。長期以來，綜合運用各種康復(fù)手段治療疾病是康復(fù)醫(yī)學(xué)理論的一個重要指導(dǎo)思想。在腦缺血動物實驗方面，研究者們同樣綜合使用運動訓(xùn)練、豐富環(huán)境和藥物輔助等方法觀察療效。

2、在實驗性卒中研究資料中，有確鑿的證據(jù)表明將大鼠飼養(yǎng)于豐富環(huán)境中，即動物有機會進行社會交往，探索和進行各種體力活動，但不進行特殊訓(xùn)練，與飼養(yǎng)在標準的實驗環(huán)境中相比，其功能后果改善更明顯。 眾所周知，中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nerve system，CNS)具有可塑性。目前認為腦損傷后功能恢復(fù)與腦的結(jié)構(gòu)和功能可塑性有關(guān)，且已發(fā)現(xiàn)一些可塑性相關(guān)分子。近十幾年來，人們發(fā)現(xiàn)在成年腦組織內(nèi)存在具有多種分化潛能的神經(jīng)干細胞(neural

3、 stem cell，NSC)，正常情況下處于靜息狀態(tài)，當(dāng)其所處的微環(huán)境發(fā)生改變或在外來信號的刺激下，能自我更新，并在一定條件下分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞，參與神經(jīng)系統(tǒng)的修復(fù)，這表明了CNS具有一定自我修復(fù)潛能。腦缺血是引起神經(jīng)功能障礙的常見病因，因此研究腦缺血后體內(nèi)NSC的反應(yīng)，具有重要的臨床意義。巢蛋白(nestin)被認為是神經(jīng)前體細胞的標志，已廣泛用于NSC的鑒定。神經(jīng)生長因子(nerve growth facto

4、r，NGF)具有促進神經(jīng)細胞生長同時可以誘導(dǎo)NSC遷移的作用。突觸素(synaptophysin，SYN)與神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、突觸形成及突觸小泡離子通道密切相關(guān)，通過檢測SYN表達含量的多少可直接反映突觸功能。目前尚未見探索學(xué)習(xí)對實驗性腦梗死大鼠腦內(nèi)nestin、NGF、SYN影響的報道。闡明探索學(xué)習(xí)對腦損傷功能恢復(fù)的作用及其機理，對更科學(xué)地制定康復(fù)策略具有非常重要的意義。 方法：健康雄性SD大鼠80只，其中60只電凝法造成右側(cè)大

5、腦中動脈阻斷(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型后，隨機分為探索學(xué)習(xí)組(n=30)、對照組(n=30)。探索學(xué)習(xí)組15只一組群居于迷宮籠，對照組5只一組群居于標準籠。假手術(shù)組(n=20)僅開顱不電凝大腦中動脈，居于標準籠。各組隨機選取15只在術(shù)后1天、7天、14天、28天進行行為學(xué)評測，21天始進行水迷宮評測。對照組與探索學(xué)習(xí)組于造模后1天、7天、14天及28天各取5只，假手術(shù)組于造模后7天

6、、28天各取5只處死，剖顱取腦，石蠟包埋。用免疫組化染色觀察梗死灶周圍皮質(zhì)nestin、NGF陽性細胞數(shù)及梗死灶周圍皮質(zhì)、海馬CA3區(qū)SYN光密度。 結(jié)果：行為學(xué)評分：1.造模成功與否的判斷：造模后1天，腦梗死大鼠均出現(xiàn)明顯的偏癱體征，Berderson評分多為2分，假手術(shù)組大鼠無明顯異常。2.Berderson神經(jīng)功能評分：造模后1～7天探索學(xué)習(xí)組與對照組評分差異無顯著性意義(P＞0.05)，探索學(xué)習(xí)組于14～28天恢復(fù)明顯優(yōu)

7、于對照組(P＜0.05)。3.肌力測驗及平衡木行走測驗：造模后腦梗死大鼠均出現(xiàn)肌力、平衡木行走能力下降，造模后1～7天探索學(xué)習(xí)組與對照組評分差異無顯著性意義(P＞0.05)，探索學(xué)習(xí)組于14～28天恢復(fù)明顯優(yōu)于對照組(P＜0.05)。假手術(shù)組大鼠無明顯異常。4.水迷宮試驗：從潛伏期的變化可見，與假手術(shù)組比較，腦梗死大鼠第21～25天到達平臺的潛伏期明顯延長(P＜0.05)。與對照組比較，探索學(xué)習(xí)組大鼠第21～25天達到平臺的潛伏期明顯縮

8、短(P＜0.05)。腦梗死大鼠測試前三天潛伏期迅速下降，從第24天開始趨于平緩。 nestin陽性細胞數(shù)的時程變化：假手術(shù)組大鼠可見少量nestin表達。腦梗死大鼠于造模后第7天陽性細胞最多，第14天和第28天陽性細胞逐漸減少。造模后7天和14天，探索學(xué)習(xí)組大鼠nestin陽性細胞較對照組增多有顯著性差異(P＜0.05)。而缺血后28天探索學(xué)習(xí)組與對照組陽性細胞數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。 NGF的時程變化：假手術(shù)組大鼠可見少

9、量NGF表達。腦梗死大鼠于造模后1天即可見NGF表達增加，于第7天達峰值，探索學(xué)習(xí)組較對照組增多有顯著性差異(P＜0.05)，此后兩組的NGF表達均呈下降趨勢，于28天兩組無明顯差別(P＞0.05)。 SYN光密度的時程變化：假手術(shù)組可見SYN呈點狀或顆粒樣分布。腦梗死大鼠的SYN表達在造模后7天已有所增加，探索學(xué)習(xí)組及對照組之間無明顯差異(P＞0.05)。第14天表達明顯增強，28天最強。探索學(xué)習(xí)組SYN的表達在第14、28天

10、較對照組有明顯增強，兩組之間差別顯著(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.本研究采用開顱電凝嗅束近端至大腦下靜脈之間一段MCA的方法，成功地制作了大鼠大腦中動脈分布區(qū)局灶性腦梗死模型。 2.局灶性腦梗死后給予探索學(xué)習(xí)可促進大鼠行為學(xué)和空間記憶能力的恢復(fù)。 3.nestin是NSC的標志，在腦損傷的修復(fù)中發(fā)揮重要作用。探索學(xué)習(xí)可增強局灶性腦梗死大鼠nestin的表達。 4.NGF是神經(jīng)系統(tǒng)重要的生物活性分