組織芯片研究腫瘤轉移相關基因mRNA及蛋白在胃癌中的表達意義.pdf

1、胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，雖然近年其發(fā)病率有下降，但惡性腫瘤死亡人數中胃癌仍占首位。引起胃癌病人死亡的主要原因是腫瘤的復發(fā)和轉移。盡管在臨床上原發(fā)灶轉移一直是影響腫瘤療效的主要因素，但轉移是一個發(fā)生在活體內、難以被觀察到的隱匿過程，臨床醫(yī)師對轉移過程的關注往往不如對轉移結果的重視，對腫瘤浸潤轉移的生物學過程更是缺乏了解。 惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移是一個多因素、多階段、涉及多基因參與調控的病理過程。從基因水平上研究腫瘤進展

2、的分子機制，獲取腫瘤細胞生長各期相關基因及對這些基因的mRNA和蛋白表達水平的檢測，可為腫瘤的分子病理診斷、臨床預后判斷及治療方案的選擇提供理論指導，因而成為當前深入研究和關注的熱點之一。 在胃癌浸潤、轉移相關研究中，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)諸多如EGFR、bFGF、MMPS、E-CD和MDR1等基因參與其發(fā)展、演進過程，任何一個基因的mRNA及其蛋白表達都是在其他基因表達所構成的背景下完成的。傳統(tǒng)對胃癌浸潤轉移的研究僅局限于單一轉移相關基因

3、，不能反映胃癌轉移的潛勢，同時各研究室報道的結果也不盡一致，缺乏同等水平的可比性，因此我們從了解單個基因表達走向探討多個基因構成的表達模式，選擇claudin1、cx43、CYR61、NOV、snail等五個基因，從它們的mRNA及其相應蛋白水平進行研究。Claudin1和cx43是構成細胞間連接的重要的連接蛋白，CYR61和NOV同屬于CCN家族成員，是一種分泌型，富含半胱氨酸的肝磷脂結合蛋白，鋅指轉錄因子Snail屬于snail超家

4、族成員。研究發(fā)現(xiàn)在不同腫瘤中它們的表達改變不盡相同，可能在不同腫瘤中它們發(fā)揮不同的作用。迄今為止，國內外對于Claudin1、cx43、CYR61、NOV和snail這五個基因在胃癌中的表達情況報道很少。 組織芯片(TissueChip，TC)，又稱組織微陣列(TissueMicroarray,TMA)，是一種以形態(tài)學為基礎的分子生物學新技術。其為醫(yī)學分子生物學提供了一種高通量、大樣本以及快速的分子水平的分析工具。 本實

5、驗搜集紹興市第一人民醫(yī)院1995年-2000年間的100例手術切除胃癌標本，并隨機選取同期25例正常胃粘膜組織標本作為對照。實驗內容主要包括復習病歷和HE切片，由有經驗的醫(yī)生核實臨床病理診斷，選取樣點做成組織芯片，然后分別采用原位雜交及免疫組織化學技術檢測claudin-1、cx43、CYR61、NOV和snailmRNA和claudin-1及cx43蛋白的表達情況，最后結合實驗結果、臨床病理資料及隨訪資料進行綜合分析。 統(tǒng)計學

6、采用SPSS13.0軟件包，包括X2檢驗、Spearman等級相關分析、Kaplan-Meier生存曲線分析、時-序檢驗等。P值以0.05作為顯著性檢驗標準。 原位雜交的結果表明，在100例胃癌和25例正常胃粘膜組織中，claudin1mRNA、cx43mRNA和NOVmRNA的表達率分別依次為42％(42/100)與100％(25/25)，35％(35/100)與88％(22/25)和50％(50/100)與64％(16/25

7、)。claudin1mRNA的表達與TNM分期(r=-0.303，P=0.015)、浸潤深度(r=-0.259，P=0.021)、脈管侵犯(r=-0.312，P=0.002)及淋巴結轉移(r=-0.307，P=0.002)呈負相關；cx43mRNA腫瘤大小(r=-0.377，P=0.000)、TNM分期(r=-0.306，P=0.021)、浸潤深度(r=-0.288，P=0.016)、脈管侵犯(r=-0.206，P=0.039)、淋巴結

8、轉移(r=-0.258，P=0.010)及遠處轉移(r=-0.235，P=0.019)呈負相關；NOVmRNA的表達與浸潤深度(r=-0.262，P=0.009)和分化程度(r=-0.244，P=0.015)呈負相關。Claudin1mRNA和Cx43mRNA陽性表達病例的平均生存時間和5年生存率均明顯高于陰性表達的病例(P＜0.01)，Claudin1mRNA和Cx43mRNA陽性表達病例的預后較好；NOVmRNA的表達與胃癌患者的生

9、存情況無顯著相關性，因此不能夠作為指導預后的生物學指標。而100例胃癌中CYR61mRNA和snailmRNA在胃癌和正常胃粘膜中的表達率分別是37％(37/100)與4％(1/25)，和46％(46/100)與16％(4/25)。CYR61mRNA的陽性率與腫瘤大小(r=0.318，P=0.001)、TNM(r=0.331，P=0.007)、浸潤深度(r=0.253，P=0.014)、淋巴結轉移(r=0.285，P=0.004)呈正相

10、關；snailmRNA的陽性率與TNM(r=0.176，P=0.027)、分化程度(r=0.203，P=0.042)、脈管侵犯(r=0.208，P=0.038)及淋巴結轉移(r=0.299，P=0.003)呈正相關。CYR61mRNA和snailmRNA陽性表達病例的平均生存時間和5年生存率均明顯低于陰性表達的病例(P＜0.01)，CYR61mRNA和snailmRNA陽性表達病例的預后相對較差。Cox多因素分析claudin1mRNA

11、的表達水平不僅與胃癌預后相關，而且還是影響胃癌預后的獨立因素(OR=0.036)。 免疫組化的結果表明，100例胃癌中claudin-1蛋白及cx43蛋白的陽性表達率分別為43％、40％；claudin1蛋白的陽性率與腫瘤大小(r=-0.207，P=0.039)、浸潤深度(r=-0.292，P=0.013)、TNM分期(r=-0.371，P=0.002)、脈管侵犯(r=-0.333，P=0.001)、淋巴結轉移(r=-0.366

12、，P=0.002)和遠處轉移(r=-0.249，P=0.013)呈負相關；cx43蛋白的陽性率也與腫瘤大小(r=-0.208，P=0.037)、浸潤深度(r=-0.279，P=0.012)、TNM分期(r=-0.346，P=0.002)、脈管侵犯(r=-0.352，P=0.000)、淋巴結轉移(r=-0.351，P=0.000)、遠處轉移(r=-0.223，P=0.026)和神經侵犯(r=-0.286，P=0.004)呈負相關；clau