F5菌毛基因的克隆、表達及單克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、由產腸毒素大腸桿菌(ETEC)引起的仔豬、犢牛和羔羊腹瀉是幼畜的一種最常見病，在世界范圍造成嚴重的經濟損失。ETEC菌株的致病前提是通過細菌表面的黏附素與宿主黏膜上皮細胞表面的相應受體結合，從而在該局部組織定居、繁殖、產生毒素或侵入深部損傷或破壞組織，引起疾病或造成隱性感染。而F5+ETEC是引起仔豬腹瀉病的重要病原菌之一，因而對F5菌毛進行深入研究具有重要的理論及現實意義。 本研究根據已發(fā)表的F5菌毛基因序列設計引物，用PCR

2、擴增法從F5+參考菌株中擴增出496bp的基因序列，通過測序和序列分析比較，所獲核苷酸序列與己發(fā)表的F5菌毛基因序列同源性達到99.8％。將不含信號肽的F5基因片段按正確的閱讀框架克隆入pET-30a(+)表達載體中，用IPTG誘導實現其在大腸桿菌中的表達。SDS-PAGE電泳和Western-blotting結果顯示，表達的融合蛋白約為23ku。將原核表達產物經Ni-NTA柱提純后免疫BALB/c小鼠，利用淋巴細胞雜交瘤技術，采用間接

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