海帶和菲律賓蛤仔提取物對酪氨酸酶活性和黑素生成影響的研究.pdf

1、酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一種含銅的氧化還原酶,廣泛存在于生物體中,是生物體合成黑色素的關鍵酶,篩選天然來源的酪氨酸酶抑制劑,可以為美白化妝品或以酪氨酸酶為作用靶點的藥物開發(fā)提供依據。
　　 本研究對15種海洋藻類和5種海洋動物進行了酪氨酸酶抑制活性的篩選,結果表明海帶和菲律賓蛤仔提取物對酪氨酸酶有明顯的抑制作用。通過正交試驗確定了這兩種海洋生物提取物的最佳提取條件,系統(tǒng)研究了提取物對酪氨酸酶的抑制效果和作用機理,評

2、價了其抗紫外線催化作用等生物活性,相關研究內容及結果如下:
　　 1.建立了篩選酪氨酸酶抑制劑的反應體系,確定以1.0mmol/L的多巴為底物,酶的終質量濃度為3.14mg/L,反應溫度32℃,pH6.8,反應穩(wěn)態(tài)時間為1min,以20％DMSO水溶液為測活提取物溶劑。依據建立的篩選體系,比較了15種海洋藻類和5種海洋動物提取物的酪氨酸酶抑制活性,發(fā)現海帶提取物和菲律賓蛤仔提取物對酪氨酸酶抑制活性最強。
　　 2.用傳統(tǒng)

3、浸提法對海帶中的酶抑制成分進行提取,通過單次單因素實驗與正交試驗結合的方法對提取條件進行了優(yōu)化。最佳提取條件為:乙醇濃度50％,提取溫度40℃,提取時間為3h,料液比為1g:12mL。乙醇提取物經有機溶劑萃取,依次得到乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性組分,酶活抑制實驗表明:水溶性組分對酪氨酸酶有明顯的抑制作用,其IC50約為0.16 mg/mL。進一步動力學分析表明,水溶性組分對酪氨酸酶具有競爭性可逆抑制作用,抑制常數K1=0.07

4、mg/mL。定性測定結果表明:水溶性組分中具有其他兩種萃取物所不具備的酚類等物質,結合已有研究,初步判斷水溶性組分中對酩氨酸酶起抑制作用的物質很可能是酚類。采用等毒法研究水溶性組分與熊果苷和曲酸的協(xié)同抑制作用,結果表明:水溶性組分與曲酸對抑制酪氨酸酶活性有協(xié)同作用。
　　 3.對菲律賓蛤仔提取物的最佳提取條件為:乙醇濃度95％,提取溫度50℃,提取時間為4h,料液比為1g:8mL。菲律賓蛤仔乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性組

5、分都具有較強的酪氨酸酶抑制作用,IC50分別為0.43mg/mL、0.63mg/mL、0.72 mg/mL。進一步動力學分析表明,乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物對酪氨酸酶具有非競爭性可逆抑制作用,抑制常數分別為0.47mg/mL、0.71mg/mL。水溶性組分對酪氨酸酶具有競爭性可逆抑制作用,抑制常數為0.31mg/mL。聯合抑制試驗表明:乙酸乙酯萃取物與熊果苷對抑制酪氨酸酶活性有協(xié)同作用,水溶性組分與曲酸具有協(xié)同作用。
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