BSG和CKIP-1基因多態(tài)性與中國漢族人群性慢性充血性心力衰竭易感性的關聯研究.pdf

1、第一章中國人群BSG基因SNP的發(fā)掘及連鎖不平衡分析
　　目的：
　　Basigin(BSG)又稱為CD147或細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子(extracellular matrix metalloproteinase-inducer，EMMPRIN)，與惡性腫瘤的浸潤與轉移、心血管結構重構、炎癥反應以及細胞組織的分化和發(fā)育密切相關。本研究旨在查明健康中國漢族人群中BSG基因的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotid

2、e polymorphism，SNP）分布及其連鎖不平衡情況。
　　方法：
　　隨機收集48例健康、無親緣關系的中國漢族人外周血液并提取基因組DNA，設計引物對所有個體BSG基因的啟動子區(qū)、外顯子區(qū)和外顯子內含子交界區(qū)的序列進行PCR擴增和正反向測序，通過判讀測序峰圖，明確SNP的發(fā)生情況及其頻率;通過Hardy-Weinberg平衡分析、單倍型推測和連鎖不平衡分析，確定BSG基因位點的單倍型標簽SNP(haplotypet

3、ag SNP，htSNP);中性理論檢驗查明該基因位點SNP頻率分布是否符合選擇中性。
　　結果：
　　BSG基因位點共發(fā)現21個SNP，其中包括2個新發(fā)現的SNP6978G＞A和7949 C＞T;發(fā)掘到的17個常見SNP只有7個出現在HapMap數據庫中;所有SNP位點基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。根據連鎖不平衡結構，該基因位點共推測出4個單倍型域，確定其中9個SNP為單倍型標簽SNP(haplotyp

4、e tag SNP，htSNP)。中性理論檢驗結果提示健康中國漢族人群BSG基因的SNP分布符合中性進化假說(Tajima'sD=1.75, P＞0.05; D*=0.48, P＞0.1; F*=1.14,P＞0.1)。
　　結論：
　　1)本研究首次對中國健康漢族人群BSG基因的SNP進行了發(fā)掘，發(fā)現其2個新的SNP。
　　2)中國健康漢族人群BSG基因的SNP分布符合中性進化假說。
　　3)中國漢族人群BSG

5、基因位點共確定有9個單倍型標簽SNP，為在該群中研究BSG基因多態(tài)性與疾病易感性或藥物反應性個體差異奠定了基礎。
　　第二章 BSG基因多態(tài)性與中國漢族人群慢性充血性心力衰竭的遺傳易感性研究
　　目的：
　　查明中國漢族人群中BSG基因多態(tài)性與慢性心衰(chronic congestiveheart failure，CHF)遺傳易感性的關聯關系。
　　方法：
　　收集770例CHF住院患者以及與之年齡、性別

6、相匹配486例漢族健康成年人的外周靜脈血標本，酚氯仿抽提法提取所有受試者外周血DNA。通過PCR產物Sanger測序對BSG基因的4個單倍型標簽單核苷酸多態(tài)性(SNP)rs1803202 C＞T、rs2229664 C＞G、rs4919862 C＞T和rs8259A＞T進行基因分型;同時收集兩組人群的臨床和實驗室檢查指標。Logistic回歸分析每個位點SNP與CHF易感性間的關聯關系。
　　結果：
　　在所有的CHF病例和

7、對照人群中，rs1803202 C＞T、rs2229664 C＞G、rs4919862 C＞T和rs8259 A＞T四個SNP位點低頻等位基因及各位點基因型的頻率分布無明顯差異;以是否吸煙以及CHF患者是否合并高血壓進行分層分析發(fā)現，在非吸煙人群與非高血壓人群中，與rs8259 AA純合子基因型個體相比較，攜帶rs8259 T等位基因的個體心衰的發(fā)生風險顯著升高（非吸煙人群中:OR=1.357，95％可信區(qū)間為1.01-1.82，P=0

8、.042;非高血壓人群中:OR=1.777，95％可信區(qū)間為1.30-2.43，P＜0.001）。通過對CHF的危險因素進行校正，發(fā)現rs8259 T等位基因升高CHF發(fā)病風險的作用仍具有顯著意義（非吸煙人群:OR=1.82，95％可信區(qū)間為1.011-1.821，P=0.017;非高血壓人群:OR=1.459，95％可信區(qū)間為1.022-2.082,P=0.037)。
　　結論：
　　BSG基因rs8259 A＞T多態(tài)性與

9、中國漢族人群中非吸煙、非高血壓個體慢性心衰的遺傳易感性相關，攜帶rs8259 T等位基因的個體慢性心衰的發(fā)病風險增加。
　　第三章 CKIP-1 Pro21Ala多態(tài)性與中國漢族人群慢性充血性心力衰竭易感性的關聯研究
　　目的：
　　Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，也稱蛋白激酶B，在調節(jié)心肌細胞生長、心肌血管新生、心肌細胞代謝和細胞凋亡等方面發(fā)揮重要作用。短期激活Akt可促進心肌的生理性肥大，保護心肌損傷，而長期激

10、活Akt則導致心肌病理性肥大和心力衰竭。酪蛋白激酶2相互作用蛋白1（casein kinase2-interacting protein-1，CKIP-1）是近年來發(fā)現的Akt相互作用蛋白，可抑制Akt的活性，穩(wěn)定表達CKIP-1可導致Akt失活，抑制細胞生長。因此，CKIP-1表達水平或功能改變可能在心力衰竭的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。此部分研究旨在探討CKIP-1多態(tài)性與中國長沙及周邊地區(qū)漢族人群心力衰竭遺傳易感性的關系。
　　方

11、法：
　　收集慢性心力衰竭病患者血液標本842例，收集性別年齡相匹配的健康對照人群血液標本803例;對Hapmap數據庫中國人群CKIP-1基因位點的SNP數據進行分析;應用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)法對CKIP-1 Pro21Ala(rs2306235 C＞G)多態(tài)性進行基因分型;x2檢驗比較病例和對照人群中基因型分布的異同，Logistic回歸分析確定CKIP-1 Pro21Ala多態(tài)性與CHF易感

12、性間的關聯關系。
　　結果：
　　健康對照人群中CKIP-1 rs2306235多態(tài)位點CC、GC和GG基因型頻率分別為82.3％、17.4％和0.28％，慢性心力衰竭病病例中該位點CC、GC和GG基因型頻率分別為81.5％、17.2％和1.35％。該多態(tài)性位點基因型分布在病例和對照人群中均符合Hardy-Weinberg平衡。x2檢驗結果表明，病例和對照人群中該位點GG基因型的頻率存在顯著差異，病例組rs2306235 G

13、G基因型頻率顯著高于對照人群(x2=4.92，P=0.0231)，但該基因型與CHF易感性的關系在校正CHF各風險因素后不明顯。根據CHF患者是否伴有高血壓進行分層分析發(fā)現，Pro21Ala多態(tài)性與伴有高血壓的個體發(fā)生CHF的風險顯著增加[校正后比值比(odds ratio，OR)=5.163，95％可信區(qū)間（confidence interval，CI）=1.032-25.84，P=0.046);將心衰患者根據心功能等級分層后發(fā)現，r

14、s2306235 GG基因型頻率在心衰Ⅲ/Ⅳ級患者中顯著升高(OR=6.262，95％CI=1.32-29.62，P=0.0172)。但二元logistic回歸分析總體人群和分層研究后的結果，在經年齡、性別、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病以及高脂血癥校正后均無顯著意義(P＞0.05)。
　　結論：
　　1)CKIP-1 Pro21Ala多態(tài)性突變等位基因21Ala在中國健康人群中的頻率為10.0％，屬常見多態(tài)性。
　　2)