山東省兒童孤獨癥全基因組掃描.pdf

1、孤獨癥（autism）是兒童廣泛性發(fā)育障礙（pervasive developmental disorder，PDD）的一種類型，男女比例為4～10：1。起病于嬰幼兒期，主要表現為不同程度的言語發(fā)育障礙、人際交往障礙、興趣狹窄和行為方式刻板。孤獨癥屬于多基因遺傳病，有較高的遺傳異質性。 定位克隆方法在單基因遺傳性疾病研究中的成功運用，激發(fā)了人們研究多基因疾病的希望和熱情，定位克隆作為一種成熟的技術方法，可以揭示精神疾病的遺傳病因

2、。我們采用了Barcellos（1997）等提出的用DNA混合池全基因組掃描關聯分析方法，完成了對山東省38例兒童孤獨癥患者，患兒父母以及1000例正常對照者的全基因組掃描關聯分析研究，共發(fā)現了4個關聯位點。 目的:用DNA混合池（DNA pooling）的方法，通過覆蓋全基因組的400個微衛(wèi)星遺傳標記（STR）對兒童孤獨癥患者、父母以及正常對照者進行基因組掃描，尋找與本病關聯的遺傳位點。 對象和方法: 1、對象

3、 采用國際精神疾病診斷標準ICD-10作為兒童孤獨癥的診斷標準，選擇在山東省精神衛(wèi)生中心就診的孤獨癥患兒38例，患兒父母75例，對照組選擇了山東省血液中心的獻血者1000例。 2、方法 2．1 采用傳統的酚-氯仿法提取被試者外周靜脈血基因組DNA。采用BECKMAN，DU530紫外分光光度儀（美國貝克曼公司）測定DNA濃度。用雙蒸水將DNA樣品稀釋至終濃度20 ng/μL。 2．2 每個樣本取10μL濃度

4、為20 ng/μL的DNA溶液進行混合，分別構建患兒組，父母組和對照組DNA混合池。 2．3 選用美國應用生物系統公司（Applied Biosystem，ABI）的Linkage Mapping Set2．5試劑盒，共400對微衛(wèi)星引物，其平均遺傳間距為10 cM（厘摩）。逐一對38例孤獨癥患者、75例患者父母與1000例正常對照者組成的DNA混合池樣本進行DNA擴增，然后在3100 Avant（Applied Biosyst

5、em，ABI）毛細管遺傳分析儀上進行基因組掃描，用Genemapper4．0軟件進行基因分型。 3、統計學處理混合池DNA樣本經PCR擴增和基因分型后，可產生由一系列等位基因構成的等位基因圖譜（allele image pattern，AIP）。采用Clump2．3軟件對患兒組、父母組和正常對照組每個位點上的等位基因頻率進行計算，分別比較患兒組與父母組，患兒組與正常對照組之間基因頻率的差異，以P<0．01作為差異有顯著性的標準，

6、確定關聯遺傳位點。 結果: 通過反復實驗，我們最終獲得了所有400個位點的基因分型。其中D2S2382與D5S2115位點在該人群中的等位基因只有一種，無多態(tài)性。在1號染色體上的D1S214，4號染色體上的D4S392、D4S1535，7號染色體上的D7S513，患者組與患者父母組或正常對照組統計分析計算的P值<0．01，差異有顯著性意義，顯示與孤獨癥存在關聯。 結論: 山東省人群的孤獨癥患者中在1p36