RGD-USPIO納米粒構(gòu)建及其在腫瘤MRI診斷中應(yīng)用.pdf

1、本研究分為二部分，第一部分，目的:制備具有腫瘤新生血管靶向的超順磁性造影劑；體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)cRGD-USPIO與細(xì)胞的結(jié)合能力并初步探討其在腫瘤MR成像中的應(yīng)用。
　　 方法:化學(xué)共沉淀一步法制備超小型超順磁性氧化鐵納米粒,采用化學(xué)交聯(lián)法將含有RGD序列的環(huán)形短肽(cRGD)與USPIO共價(jià)結(jié)合制備具有腫瘤新生血管靶向的超順磁性氧化鐵納米粒；光學(xué)顯微鏡、透射電鏡對(duì)所制備的腫瘤新生血管靶向納米粒行形態(tài)學(xué)觀察和核心粒徑大小的檢測(cè)；

2、采用激光散射粒度分析儀測(cè)定USPIO和cRGD-USPIO的粒徑分布；振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)檢測(cè)比飽和磁化強(qiáng)度；采用鄰二氮菲法檢測(cè)cRGD-USPIO中鐵含量。培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs),并將cRGD-USPIO和USPIO分別與A549細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞孵育24h,24h后采用普魯士蘭染色法檢測(cè)cRGD-USPIO和USPIO與人肺腺癌A549細(xì)胞及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的特異性結(jié)合能力；在體內(nèi)試驗(yàn)中,建立A54

3、9裸鼠移植瘤模型,先行平掃,然后分別尾靜脈注射USPIO和cRGD-USPIO,24h后行MRI檢測(cè)并收集信號(hào)強(qiáng)度,與USPIO對(duì)比,評(píng)價(jià)cRGD-USPIO對(duì)腫瘤MRI信號(hào)增強(qiáng)作用。
　　 結(jié)果:制備獲得cRGD-USPIO納米粒,其核心納米粒徑為5nm～10nm,cRGD-USPIO平均粒徑為(43.97±10.1)nm,飽和磁化強(qiáng)度為59.94 emu/g,其鐵的含量為22.88mg/ml。細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示與USPIO

4、組比較,cRGD-USPIO組陽(yáng)性染色明顯增強(qiáng)。動(dòng)物體內(nèi)MRI診斷結(jié)果顯示,USPIO組信號(hào)強(qiáng)度降低值為315.76±69.85,cRGD-USPIO組的信號(hào)強(qiáng)度降低值為792.17±116.51,約是USPIO組信號(hào)強(qiáng)度降低值的2.5倍,腫瘤信號(hào)強(qiáng)度明顯降低(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:成功制備了cRGD-USPIO納米粒,該納米粒具有良好的理化性質(zhì)；構(gòu)建的靶向超順磁性氧化鐵納米粒與A549細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合率為1

5、00％；裸鼠體內(nèi)試驗(yàn)提示構(gòu)建的靶向超順磁性氧化鐵納米?？沙蔀橐环N新型有助于腫瘤早期診斷特異性的MRI陰性造影劑。
　　 第二部分：cRGD-USPIo納米粒的急性、亞急性毒理實(shí)驗(yàn)
　　 目的:研究實(shí)驗(yàn)制備的cRGD-USPIO納米粒的毒性。
　　 方法:昆明小鼠30只,分為3組,分別尾靜脈注入生理鹽水,低劑量的cRGD-USPIO和高劑量的cRGD-USPIO,觀察外部器官、皮毛的變化、活動(dòng)量、進(jìn)食量、體重等變化

6、；2周后,從眼球后靜脈叢取血測(cè)定紅細(xì)胞(RBC)總數(shù)、白細(xì)胞(WBC)總數(shù)、血紅蛋白(HGB)、血小板(Plt)、和測(cè)定血清生化指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、尿素(UREA)、尿酸(UA)、肌酐(CREA)的含量,然后各組隨機(jī)處死5只,處死后計(jì)算各器官的臟器指數(shù),并做病理切片行HE染色和普魯士藍(lán)染色。
　　 結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)采用最大給藥量的方法,在受試小鼠的急性毒性試驗(yàn)中,未見(jiàn)有小鼠死亡,發(fā)現(xiàn)

7、高劑量組在給藥后有暫時(shí)的少動(dòng)現(xiàn)象,而其他劑量組均正常,1周后各劑量組小鼠的外部器官、皮毛、活動(dòng)量、進(jìn)食量等均正常；2周后從眼球后靜脈叢取血測(cè)血常規(guī),發(fā)現(xiàn)低劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異；血清主要生化指標(biāo)結(jié)果顯示,各組指標(biāo)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異；各實(shí)驗(yàn)組的小鼠體重沒(méi)有明顯的差異,各組的臟器指數(shù)也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組小鼠臟器標(biāo)本的病理切片HE染色中可見(jiàn),小鼠肝、脾、腎、心、肺細(xì)胞均無(wú)水腫、變性、壞死等改變；在組織的普魯士蘭染色中,我們可