GLSBr系列化合物的藥代動力學(xué)特征及其吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究.pdf

1、背景和目的： 臨床廣泛應(yīng)用的抗HBV藥多是核昔類化合物，其耐藥性和停藥復(fù)發(fā)率日趨明顯。GLSBr是化學(xué)合成的非核苷類系列化合物，它在動物體內(nèi)外試驗(yàn)中已呈現(xiàn)抗HBV的全新作用機(jī)制和令人矚目的效應(yīng)。然而至少有40％的新化合物是因其吸收、分布、代謝及排泄特性的不理想而被淘汰。因此，探明GLSBr系列化合物的藥代特征及吸收機(jī)制是其能否成為創(chuàng)新抗HBV藥物的關(guān)鍵所在。本文旨在試驗(yàn)研究GLSBr系列化合物的藥代動力學(xué)特征，探明其優(yōu)勢化合物的

2、吸收機(jī)制，為GLSBr系列化合物的優(yōu)選和研發(fā)提供試驗(yàn)和理論依據(jù)。 　方法： 1.首先摸索和建立RP-HPLC檢測GLSBr系列化合物生物樣本的方法，并進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)考察。選取48只SD大鼠，隨機(jī)分為12組，分別灌胃或尾靜脈注射高低二個劑量組的GLSBr-1、GLSBr-2和GLSBr-3溶液，于給藥前和給藥后自大鼠球后靜脈叢取系列血樣，采用RP-HPLC檢測血中GLSBr濃度。運(yùn)用DAS2.0軟件求算GLSBr系列化合

3、物的主要藥動學(xué)參數(shù)。 2.另取24只SD大鼠，隨機(jī)分為6組，分別經(jīng)尾靜脈注射GLSBr-1、GLSBr-2和GLSBr-3溶液，于給藥后10min、2h斷頭處死，取血及肝、腎、腦組織。RP-HPLC測定GLSBr系列化合物的組織濃度。 3.對RP-HPLC測試出的GLSBr-3可疑代謝產(chǎn)物選用LC-MS-MS定性分析代謝物的基本結(jié)構(gòu)，并摸索和建立GLSBr-3原形和代謝物的LC-MS檢測方法，定量測定和分析比較血漿與組織

4、中GLSBr-3原形和該代謝產(chǎn)物濃度的差異性。 4.建立并全面評價Caco-2單層細(xì)胞模型的特性，采用該Caco-2細(xì)胞模型試驗(yàn)觀察優(yōu)選的GLSBr-3吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)過程；考察時間、底物濃度、體系溫度、培養(yǎng)介質(zhì)PH值以及P-gp抑制劑Ver對GLSBr-3在Caco-2細(xì)胞中攝取的影響；RP-HPLC測定Caco-2細(xì)胞內(nèi)外GLSBr-3的濃度。并運(yùn)用SPSS12.0、Excel 2003軟件分析和統(tǒng)計(jì)處理細(xì)胞試驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)，探討G

5、LSBr-3在Caco-2細(xì)胞攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)的方式。 結(jié)果： 1.建立的血漿樣本和組織樣本RP-HPLC/LC-MS檢測方法具有較高的靈敏度和專屬性，方法學(xué)考察結(jié)果符合生物樣本分析的要求。 2.GLSBr-1和GLSBr-2的體內(nèi)過程符合二室模型：當(dāng)80mg/kg GLSBr-1，11mg/kg GLSBr-2時，符合一級動力學(xué)過程，GLSBr-1和GLSBr-2在大鼠體內(nèi)的t1/2z分別為4.56±1.67h和0.

6、95±1.21h:且GLSBr-1在體內(nèi)停留的時間明顯比GLSBr-2長(P＜0.05)；而GLSBr-3在RP-HPLC檢測條件下無法測出。 3.靜注不同劑量的GLSBr-1和GLSBr-2在肝、腎組織中均能測得濃度，其中肝濃度最高：為1.25±0.23和0.61±0.27μg·mL-1；腎濃度其次：為0.51±0.37和0.26±0.08μg·mL-1：GLSBr-1在腦中測得的濃度為0.34±0.10μg·mL-1，而GL

7、SBr-2在腦組織中無法測到。這種組織分布特點(diǎn)有利于GLSBr-1和GLSBr-2在肝中發(fā)揮藥物作用。 4.在大鼠血漿中，RP-HPLC檢測未顯示GLSBr-3色譜峰，但卻穩(wěn)定的出現(xiàn)另一與濃度密切相關(guān)的可疑代謝峰，經(jīng)LC-MS-MS分析測試，該代謝產(chǎn)物是GLSBr-3由C21H22N4O3FSBr分子酯鍵水解為C19H18N4O3FSBr而來。LC-MS檢測結(jié)果表明，雖然小鼠血漿中GLSBr-3的此代謝物濃度高于原形藥濃度；但小

8、鼠肝、腎組織中GLSBr-3的濃度卻明顯高于代謝物，且GLSBr-3在肝中濃度最高：0.79±0.08μg·mL-1，持續(xù)時間長達(dá)8h以上，表明GLSBr-3具有肝趨向分布的優(yōu)勢。 5.Caco-2細(xì)胞攝取GLSBr-3隨著時間的增加而增多，在濃度為6.25～50μg/mL范圍內(nèi)，隨著GLSBr-3濃度的增加攝取量呈線性遞增，未出現(xiàn)飽和現(xiàn)象，但溫度對GLSBr-3的攝取量有著顯著的影響(P＜0.05)，PDR值為1.335±0.

9、141，這提示Caco-2細(xì)胞攝取GLSBr-3有被動擴(kuò)散與主動轉(zhuǎn)運(yùn)兩種方式。因?yàn)镻-gp的特異性抑制劑維拉帕米不能影響GLSBr-3的攝取，所以GLSBr-3可能不是P-gp的底物。 　結(jié)論：建立的GLSBr系列化合物及代謝物的RP-HPLC/LC-MS檢測方法可用于本試驗(yàn)研究；GLSBr-1和GLSBr-2在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程符合二室模型特征，GLSBr系列化合物在大鼠組織中的分布特點(diǎn)是肝＞腎＞腦，這有利于其在肝中發(fā)揮