黃芪多糖對P53基因介導的信號傳導與胃癌發(fā)生發(fā)展的相關性研究.pdf

1、P53是重要的腫瘤抑制基因，經研究表明，在人類50％以上的腫瘤組織中p53基因均有不同程度的突變，目前遺傳學認為其可能是腫瘤中最常見的遺傳學改變，說明該基因的改變很可能是人類腫瘤產生的主要發(fā)病因素。由p53介導的細胞信號轉導途徑在調節(jié)細胞正常生命活動中起重要作用，但其與細胞內其它信號轉導通路之間的聯系相當復雜。本次實驗主要采用裸鼠模型將SGC-7901人胃癌細胞直接接種，再予以黃芪多糖治療，觀察黃芪多糖對SGC-7901人胃癌細胞移植瘤

2、裸鼠的體重、體積、抑瘤率等多方面的作用;同時檢測P53下游Bcl2/Bax、Fas/FasL表達及PTEN、NF-κ B、CDX2基因表達的結果。找出黃芪多糖對P53基因介導的信號傳導與胃癌發(fā)生發(fā)展之間的關系。最后采用體外培養(yǎng)SGC-7901人胃癌細胞，采用MTT，觀察SGC-7901人胃癌細胞的增殖和細胞周期在黃芪多糖的作用下有什么變化。
　　第一部分黃芪多糖對SGC-7901人胃癌細胞移植瘤裸鼠的影響
　　第一節(jié)人胃癌細

3、胞SGC-7901的培養(yǎng)與收集
　　采用常規(guī)培養(yǎng)人胃癌細胞SGC-7901，隨后對人胃癌SGC-7901細胞取對數生長期，制成單細胞懸液，在臺盼藍染色計數下將細胞濃度調整至1.0×108/ml。通過上述方法即可得到本實驗所需的人胃癌細胞SGC-7901單細胞懸液。最后收集對數生長期的SGC-7901人胃癌細胞，制備成相應濃度的單細胞懸液，轉移至裸鼠。
　　第二節(jié)黃芪多糖對SGC-7901人胃癌細胞移植瘤裸鼠的體重、腫瘤體積、

4、抑瘤率以及病理學檢查結果的影響
　　對裸鼠使用培養(yǎng)后的SGC-7901人胃癌細胞進行接種，得到荷瘤裸鼠。將其隨機分為模型組、黃芪多糖高劑量組、5-FU和黃芪多糖低劑量組，于治療開始第0、7、14、21、28天分別稱量裸鼠體重，測量腫瘤體積;停藥后將裸鼠處死，將瘤組織剝離后稱取瘤重，并計算其抑瘤率;結果顯示模型組裸鼠體重增長明顯，給予黃芪多糖干預后，體重差異無統(tǒng)計學意義，氟尿嘧啶組裸鼠體重明顯降低，與模型組相比具有顯著性差異;模型組

5、裸鼠腫瘤體積與重量明顯增大，黃芪多糖高、低劑量組與氟尿嘧啶組裸鼠腫瘤增長緩慢，體積與重量減小較為明顯，在統(tǒng)計學上具有顯著性差異;病理學檢查結果顯示模型組見多量腫瘤細胞彌漫性生長，瘤細胞大小不均一，形成明顯的結節(jié)狀，核大而濃染，核異型性明顯，散在的瘤細胞出現變性壞死，黃芪多糖干預治療后，瘤結節(jié)體積縮小，結節(jié)內可見少量的壞死，殘存的腫瘤細胞減少，與實驗組比較有明顯好轉。綜上，我們可明顯發(fā)現黃芪多糖能夠抑制SGC-7901人胃癌細胞移植瘤的生

6、長。
　　第三節(jié)黃芪多糖對SGC-7901人胃癌細胞移植瘤組織中P53下游基因表達的影響
　　采用體外培養(yǎng)的SGC-7901人胃癌細胞制作荷瘤裸鼠，用免疫組化法觀察黃芪多糖對SGC-7901細胞移植瘤組織中Bcl2/Bax、Fas/Fasl及PTEN、NF-κB、CDX2表達的影響，探究黃芪多糖對SGC-7901人胃癌細胞移植瘤的抑制效應及機制。經檢測表明黃芪多糖對SGC-7901細胞移植瘤具有明顯的抑制作用，其機制可能與下

7、調Bcl2/Bax和上調Fas/Fasl有關，同時APS可上調PTEN、CDX2表達和下調NF-κ B(p65)的表達，提示黃芪多糖可誘導胃癌細胞凋亡。
　　第二部分黃芪多糖對SGC-7901人胃癌細胞的增殖、凋亡、周期的影響
　　在體外培養(yǎng)SGC-7901人胃癌細胞，給予不用濃度、在不同時間采用黃芪多糖干預，用MTT、流式細胞儀法檢測細胞凋亡。實驗數據顯示SGC-7901人胃癌細胞早期凋亡、晚期凋亡的細胞增多，提示黃芪多糖