豬鏈球菌3種主要毒力因子多重PCR快速檢測(cè)方法的建立及其初步應(yīng)用.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis，SS)是一種重要的人畜共患病病原，根據(jù)菌體莢膜多糖抗原性的不同，分為35個(gè)血清型(1-34型，1/2型)。世界范圍內(nèi)以SS2(Streptococcus suis type2，SS2)流行最廣，致病性最強(qiáng)，而且可引起人的感染并致死，其次是1型、7型和9型。上海地區(qū)作為全國(guó)大規(guī)模豬養(yǎng)殖場(chǎng)較多的地區(qū)之一，是養(yǎng)豬面積較大，輸出、輸入較大的城市，因此及時(shí)掌握上海地區(qū)致病性豬鏈球菌及其毒力因子的流行

2、病學(xué)，為以后預(yù)防和控制大規(guī)模暴發(fā)豬鏈球菌具有重要的意義。 2006年-2008年期間，通過對(duì)上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心日常門診和4個(gè)某大型豬場(chǎng)的豬鏈球菌2型臨床調(diào)查，根據(jù)形態(tài)、培養(yǎng)特性，從1536份樣品中分離鑒定了304株豬源鏈球菌，利用已發(fā)表的豬鏈球菌2型菌株的莢膜多糖CPS2J的基因進(jìn)行單重PCR檢測(cè)，結(jié)合生化特性鑒定，鑒定出12株豬鏈球菌2型。對(duì)12株SS2進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明對(duì)頭孢拉啶、青霉素等產(chǎn)生了一定程度的耐藥性，

3、生化試驗(yàn)結(jié)果表明分離株的生化特性不穩(wěn)定。 建立了豬鏈球菌3種主要毒力因子多重PCR快速檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)豬鏈球菌3種主要毒力因子的快速檢測(cè)，根據(jù)豬鏈球菌3種主要毒力因子epf、sly和gapdh的基因序列，設(shè)計(jì)合成3對(duì)特異性引物，通過優(yōu)化多重PCR體系，建立豬鏈球菌3種主要毒力因子的快速檢測(cè)方法，并用此多重PCR方法對(duì)16株毒力因子背景情況清楚的豬鏈球菌菌株(包括10株SS2，3株SS1、1株SS7、2株SS9)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與已

4、知背景情況相符合，表明此方法檢測(cè)的結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明建立的多重PCR方法具有特異性高、敏感性好、重復(fù)性高，操作簡(jiǎn)單、節(jié)約時(shí)間和低成本等特點(diǎn)。為該病快速診斷和對(duì)豬鏈球菌毒力因子的分子流行病調(diào)查提供新的檢測(cè)方法。 利用建立的豬鏈球菌3種主要毒力因子多重PCR方法檢測(cè)了273株致病性豬鏈球菌菌株，以分析其三種重要毒力因子的分布。結(jié)果表明gapdh、epf和sly在致病性豬鏈球菌中檢出率比較高，檢出率分別為36.2％(99/