丙酮酸乙酯對腦外傷后大鼠的神經保護作用及其機制研究.pdf

1、[研究目的]腦外傷是青年人的主要死亡和致殘原因，它可以觸發(fā)包括氧化應激和炎癥在內的一系列級聯反應，從而導致繼發(fā)性腦損傷和長期神經功能障礙，然而目前臨床上尚無有效的治療方法能夠減輕患者的神經功能障礙，降低殘疾的發(fā)生率。越來越多的研究提示，抗氧化劑丙酮酸乙酯對急性腦損傷具有神經保護作用，機制尚未完全闡明。本研究將在大鼠腦外傷模型中研究丙酮酸乙酯的長期神經保護作用及其可能的作用機制。
　　[研究方法]將成年SD大鼠隨機分為假手術組、對照

2、組和丙酮酸乙酯處理組，進行單側大腦皮層挫傷手術。首先，我們建立大鼠腦外傷模型，并通過一系列行為學測試（包括錯步試驗、Morris水迷宮）和焦油紫染色損傷體積分析來確定丙酮酸乙酯的有效劑量和治療時間窗。隨后，我們在腦外傷后48小時向大鼠股靜脈內注射evans blue活性染料以確認血腦屏障完整性的破壞程度;通過透射電鏡來觀察各組大鼠血腦屏障超微結構的變化;并采用免疫組化、明膠酶譜、western blots和實時定量real-time P

3、CR等方法來評估各組大鼠小膠質細胞的激活情況和多種炎癥介質的mRNA水平，以及基質金屬蛋白酶（MMP-9和MMP-2）的蛋白表達和活性改變。最后，我們通過免疫組化和透射電鏡在體觀察腦外傷后大鼠軸突、髓鞘和少突膠質細胞祖細胞的形態(tài)分布和數量改變，并在體外進行大鼠原代少突膠質細胞祖細胞培養(yǎng)，以進一步探索丙酮酸乙酯對少突膠質細胞祖細胞的保護機制。
　　[結果]我們成功建立了大鼠腦外傷模型，發(fā)現在腦外傷后即刻、12、24、36、48、60

4、小時，分別向大鼠腹腔內注射丙酮酸乙酯30mg/kg可以觀察到顯著的神經保護作用，即促進腦外傷后28天大鼠的感覺運動功能和空間學習記憶能力的恢復，并能有效減少組織損傷體積。我們發(fā)現丙酮酸乙酯可以減少腦外傷后大鼠血腦屏障的滲漏，抑制小膠質細胞的過度激活，降低多種炎癥介質(TNF-α，IL-1α，IL-1β，COX-2和iNOS)的mRNA水平，并減少外傷誘導的MMP-9和MMP-2的蛋白表達和活性上調。最后，我們通過在體和離體研究發(fā)現丙酮酸