25種四川地方晾曬煙遺傳關系的SRAP分析.pdf

1、晾曬煙是雪茄煙和混合型卷煙的重要生產原料，也是進行我國煙草雜交育種的重要種質資源。四川省有悠久的晾曬煙栽培歷史和豐富的地方晾曬煙種質資源。然而目前四川省晾曬煙品種的引種、繁種、留種等工作都是由煙農自己完成，缺乏系統性的管理。另外，由于沒有標準的煙種命名方法，煙農往往根據煙草植株形態(tài)和葉片特征進行命名，這種命名方法用于形態(tài)特征不很明顯的煙草時極易造成同種異名或同名異種的混亂現象。由于長期缺乏系統性研究和管理，致使四川許多地方性晾曬煙的品種

2、來源不清，品種間遺傳關系不明，這已成為改良和利用晾曬煙的限制性因素。 鑒定晾曬煙種質資源是加快晾曬煙品種改良和利用的基礎。分子標記由于具有不受環(huán)境和其它因素的影響，穩(wěn)定性和重復性好等優(yōu)點，在煙草種質資源鑒定中被廣泛應用。SRAP標記技術是一種新型的基于PCR的標記系統。前人研究表明，SRAP標記可以很好的應用在多種作物的遺傳多樣性研究中。目前SRAP標記在煙草種質資源上的研究應用，在國內外還很少有相關報道，其中涉及到晾曬煙資源的

3、更是少之又少。因此將SRAP標記技術應用于煙草種質資源遺傳多樣性的研究中，尤其是地方晾曬煙的研究分析和鑒定評價，有助于更為準確地鑒定、評價現有種質資源，為地方晾曬煙種質資源的合理利用和優(yōu)良新品種的培育提供更可靠的依據和選擇手段。 本研究利用SRAP標記技術對25個四川地方晾曬煙(Sull-curedtobacco，Nicotianatabacum)材料進行了親緣關系研究，并以1個烤煙(Flue-curedtobacco，Nico

4、tianatabacum)和1個黃花煙(Nicotianarustia)材料作為參比；回收了部分特異標記條帶進行克隆測序，并對測序結果進行了簡單的生物信息學分析。主要研究結果如下： 1.對晾曬煙SRAP-PCR反應體系和程序進行了優(yōu)化。在本實驗中，晾曬煙SRAP-PCR最佳反應體系為：Mg2+濃度1.6mmol/L，1×Buffer，dNTP濃度0.2mmol/L，模版DNA濃度2ng/μL，Taq酶1U，正反引物總含量均為0.

5、5pmol，反應總體積為25μL。反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，33℃復性1min，72℃延伸1min，5個循環(huán)：94℃變性1min，53℃復性1min，72℃延伸1min，35個循環(huán)；最后72℃延伸8min，4℃保存。優(yōu)化后的晾曬煙SRAP體系重復性好、穩(wěn)定性強。 2.從30對SRAP引物組合中選出擴增帶紋豐富、清晰，且多態(tài)性位點百分比較高的引物組合25對。用此25對引物對27份供試煙草材料進行擴增。根據

6、數據分析采樣原則對擴增條帶進行了統計。共檢測到3368條擴增帶，其中特異性性條帶為998條，平均多態(tài)檢出率為29.6％。說明SRAP標記技術可有效應用于地方晾曬煙草種質的分析。 3.根據SRAP數據計算出了煙草種質材料間的遺傳相似系數。27份材料的遺傳相似系數為0.26～0.97，平均為0.62；黃花煙與其它26種普通栽培煙草遺傳差異極其明顯，遺傳相似系數在0.26～0.51之間：烤煙與其它25份晾曬煙品種之間的遺傳相似系數也較

7、低，在0.66～0.78之間；25份晾曬煙品種之間的遺傳相似系數在0.75～0.97之間，平均為0.86，彼此間遺傳相似性較高，而地方晾曬煙品種間遺傳相似有一定差異，但總的遺傳基礎相對較狹窄。 4.用類平均法(UPGMA)對27份材料遺傳相似系數進行聚類分析。聚類分析表明，當取遺傳相似系數為0.74時，可將黃花煙、烤煙和晾曬煙品種明顯區(qū)分開，反映出類型間的遺傳差異；當取遺傳相似系數為0.89時，可將25份晾曬煙材料3個大類和2個