羅格列酮對OLETF鼠糖尿病發(fā)病的干預作用及其機制研究——羅格列酮對OLETF鼠炎癥介質(zhì)和PPARγ表達的影響.pdf

1、[背景]隨著生活水平的提高和生活方式的改變，糖尿病的發(fā)病率逐年上升，已成為繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大嚴重危害人類健康的疾病。胰島素、促胰島素分泌劑、胰島素增敏劑等藥物的不斷開發(fā)與應用，DM的治療領域有了前所未有的改觀，但目前尚無有效手段控制DM及其并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展。DM能否預防，什么是最為有效的預防手段已成為亟待解決的問題。循證醫(yī)學研究表明，占全部DM患者90％以上的2型糖尿病(T2DM)是可以預防的，采取恰當?shù)母深A措施可以降低發(fā)

2、病危險31％-58％。因此，探討T2DM的預防成為一個重要課題。 T2DM的發(fā)病機制至今尚未完全清楚，在其發(fā)病機理和病理生理中，胰島素抵抗(IR)和胰島β細胞的功能障礙是兩個主要環(huán)節(jié)。近年來，炎癥反應在DM發(fā)生、發(fā)展中的作用及其與DM危險因素關系問題的研究受到廣泛關注。早在1950年，就有人發(fā)現(xiàn)水楊酸類抗炎藥物具有降低血糖的潛能，T2DM患者給予大量水楊酸類制劑，可顯著改善糖脂代謝異常和胰島素抵抗。20世紀90年代初，有報道某些

3、促炎癥細胞因子包括腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)、干擾素(INF)等，在多種組織中影響葡萄糖濃度的穩(wěn)定性。目前大量流行病學、臨床醫(yī)學和基礎科學的研究表明T2DM及其并發(fā)癥的發(fā)病機理與炎癥有關，T2DM是細胞因子介導的炎癥反應，或者說是一種與先天性免疫系統(tǒng)(ⅡS)有關的疾病，炎癥在DM的發(fā)病機制中有重要的作用。 馬來酸羅格列酮(RSG)，是作用最強的噻唑烷二酮類藥物，其作用靶點為過氧化物酶體

4、增殖物激活受體(,PPAR)γ，PPARγ是一種新的甾體激素受體，其結構與糖皮質(zhì)激素受體等核受體家族類似，主要在與胰島素作用有關的組織中表達，并且具備激活后調(diào)控涉及葡萄糖的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)運、利用及脂肪代謝的調(diào)節(jié)等基因的表達。有研究表明羅格列酮通過與PPARγ結合，激活PPARγ的生物學活性，起到抗炎作用，而其抗炎作用獨立于降糖效應外。因此，本實驗以炎癥為切入點，觀察羅格列酮對DM大鼠炎癥介質(zhì)的干預作用，及其對T2DM發(fā)病的預防效應。

5、為更好觀察羅格列酮的藥物干預作用，選取了國際標準的慢性自發(fā)性2型糖尿病大鼠模型之一OLETF鼠及其同種系糖耐量正常LETO大鼠，作為實驗對象，首先建立T2DM動物模型，觀察OLETF大鼠T2DM發(fā)病全過程的病理生理改變；檢測血清炎癥介質(zhì)的水平，觀察其動態(tài)變化過程；同時在DM發(fā)病初期應用羅格列酮進行干預治療，觀察羅格列酮對DM發(fā)病的干預作用；觀察羅格列酮對血清各炎癥介質(zhì)的干預作用；最后應用TaqMan實時熒光定量RT-PCR的方法，定量檢

6、測大鼠全身多個組織PPARγmRNA的表達水平，從分子生物學水平探討羅格列酮對DM發(fā)病、對炎癥介質(zhì)干預作用的可能機制，為進一步的臨床應用羅格列酮干預治療T2DM積累實驗室資料。具體研究分以下三個部分： 第一章羅格列酮對OLETF鼠糖尿病發(fā)病的干預作用 [目的]建立以OLETF大鼠為實驗對象的動物模型，應用羅格列酮進行干預治療，觀察羅格列酮對T2DM發(fā)病的預防作用，為臨床早期藥物干預治療提供動物學實驗資料。 第二章

7、羅格列酮對OLETF鼠糖尿病發(fā)病過程中炎癥介質(zhì)的影響 [目的]探討炎癥介質(zhì)與T2DM之間的關系，進一步研究T2DM免疫學發(fā)病機制；觀察羅格列酮對血清炎癥介質(zhì)的干預作用，探討羅格列酮對T2DM的抗炎作用的影響。 第三章羅格列酮對OLETF鼠各組織中PPARγmRNA表達的影響 [目的]應用TaqMan實時熒光定量RT-PCR的方法，檢測PPARγmRNA在LETO和0LETF大鼠全身多個組織中的絕對表達水平，觀察羅

8、格列酮對PPARγmRNA表達的干預作用，探討羅格列酮預防T2DM、抑制炎癥反應的可能分子生物學機制。 [結論] 1、成功建立了OLETF大鼠的T2DM動物模型，完整觀察到OLETF大鼠由NGT發(fā)展到IGT，進而發(fā)展為DM全過程的病理生理改變。 2、羅格列酮可以顯著降低OLETF鼠血糖升高程度，延緩高血糖出現(xiàn)的時間，并顯著降低T2DM的發(fā)病率，表明該藥可以有效預防OLETF鼠DM的發(fā)病，而且這種預防作用與減少大鼠

9、攝食量和降低其體重無關。此外，羅格列酮可以顯著性降低大鼠血清甘油三酯、膽固醇、游離脂肪酸和血漿胰島素水平。 3、OLETF大鼠血清hsCRP、TNF-α、IL-6、MCP-1水平顯著升高，并隨大鼠周齡的增加而升高，提示炎癥介質(zhì)參與T2DM的發(fā)生和發(fā)展。此外，血清炎癥介質(zhì)hsCRP、IL-6與ISI呈負相關，表明炎癥介質(zhì)與胰島素抵抗有關。 4、羅格列酮可以顯著降低OLETF鼠血清炎癥介質(zhì)水平的升高，提示該藥有明顯的抗炎作用

10、。 5、應用TaqMan實時熒光定量RT-PCR技術對大鼠各組織PPARγmRNA表達水平進行絕對定量分析，結果提示OLETF大鼠組織中PPARγmRNA表達量的減少可能與其T2DM的發(fā)病相關。 6、羅格列酮可以提高OLETF大鼠全身多組織中PPARγmRNA的表達水平，這可能與其預防DM的發(fā)病及抗炎的分子機制有關。 7、PPARγmRNA在腹主動脈中有表達，提示PPARγ功能可能與血管功能相關，實驗發(fā)現(xiàn)干預組血