Wnt-β-catenin信號通路在豬脂肪組織發(fā)育過程中的調控作用.pdf

1、脂肪組織不僅是被動的能量儲存器官，也是能分泌多種生物活性因子的內分泌器官。脂肪組織對生物體內能量代謝起著重要的調控作用，脂肪組織發(fā)育異常可引發(fā)肥胖、心血管疾病和II型糖尿病等相關疾病。脂肪組織的發(fā)育是一個動態(tài)平衡過程，這一過程受到許多激素、基因和信號通路的調控。近來研究表明，Wnt/β-catenin信號通路在脂肪組織發(fā)育中起著重要的調節(jié)作用。因此，本試驗以自然肥胖程度最高的動物--豬為研究對象，利用石蠟切片HE染色，冰凍切片油紅O染色

2、，石蠟切片免疫組化，細胞培養(yǎng)，SQ RT-PCR，Western Blot等細胞生物學和分子生物學技術，在明確豬脂肪組織發(fā)育的形態(tài)學和組織學規(guī)律的基礎上，研究Wnt/β-catenin信號通路相關基因在豬脂肪組織發(fā)育過程中的表達規(guī)律，探討其在豬脂肪組織發(fā)育過程中的調控作用。主要研究結果如下： 1.1日齡時，脂肪組織中含有大量的前體脂肪細胞和基質微管成分(SVF)，前體脂肪細胞體積小，核大而間質少，只分化為多室脂肪細胞，多室脂肪細

3、胞開始聚集脂滴，隨著日齡的增長，多室脂肪細胞迅速形成單室脂肪細胞，30日齡時兩種細胞幾乎各占1/2，此時單室脂肪細胞聚集脂滴的能力增強。到60日齡時，單室脂肪細胞為脂肪組織中的主要細胞。 2.隨著個體日齡的增長，脂肪細胞主要轉錄因子PPARγ、C/EBPα及LPL mRNA的表達量逐漸升高，與此同時，脂肪組織中Wnt/β-catenin信號通路相關基因β-catenin、Fz1、GSK3βmRNA的表達量逐漸降低，60日齡以后，

4、維持在一個較低的水平，同時，在前體脂肪細胞和SVF細胞中，Wnt/β-catenin信號通路中第二信使β-catcnin蛋白的表達強度逐漸減弱，并且表達部位由核、質均表達逐漸只在細胞質中表達，而成熟脂肪細胞中始終未檢測出β-catenin蛋白的表達。這表明Wnc/β-catenin信號通路相關基因在豬脂肪組織發(fā)育的早期(1～60日齡)高表達，隨著脂肪組織的發(fā)育，其表達量逐漸降低(～120日齡)。 3.INF-α在脂肪細胞分化的前

5、48 h內抑制脂肪細胞的分化，其作用呈劑量依賴型，最佳濃度為5 ng/mL。干擾Wnt/β-catenin信號通路中第二信使β-catenin基因使TNF-α抑制脂肪形成的作用受阻，從而證實其抑制作用是通過激活Wnt/β-catenin信號通路來完成的。 4.用RT-PCR方法克隆出豬β-catcnin基因全長CDS序列，GenBank的登陸號為EU431333。這為構建豬β-catenin基因的表達載體，進一步研究Wnt/β-