肌肽對星形膠質細胞及神經元能量代謝的調節(jié)作用.pdf

1、目的：
　　1.闡述生理及缺血條件下原代新生大鼠皮層星形膠質細胞的生物能量學特征。
　　2.探討肌肽對生理及缺血條件下星形膠質細胞能量代謝的調節(jié)作用。
　　3.闡明生理條件下肌肽對原代新生大鼠皮層神經元/星形膠質細胞共培養(yǎng)模型能量代謝的影響。
　　4.探究缺糖缺氧再灌注后肌肽處理對共培養(yǎng)體系能量代謝的調節(jié)作用。
　　方法：
　　1.利用海馬生物能量代謝檢測儀實時監(jiān)測細胞氧耗率(OCR)與胞外酸化率(E

2、CAR)，獲得一系列與氧化磷酸化和糖酵解有關的指標，從而來研究正常培養(yǎng)條件及體外缺糖缺氧(OGD)8 h再灌注(Recovery)24h/48h模型中皮層星形膠質細胞的生物能量學特征。
　　2.正常培養(yǎng)條件下5 mM肌肽處理星形膠質細胞24/48h，利用海馬生物能量儀研究其對星形膠質細胞能量代謝的影響。同時觀察OGD/R24 h及OGD/R48 h條件下5 mM肌肽預處理對星形膠質細胞能量代謝是否具有促進恢復作用。
　　3.

3、ATP試劑盒檢測正常培養(yǎng)條件下、肌肽處理24 h以及OGD/R24 h模型肌肽預處理后星形膠質細胞胞內ATP濃度的變化。
　　4.流式細胞儀分析肌肽處理24 h和OGD/R24 h模型中肌肽對星形膠質細胞存活的影響。
　　5.MTT還原法檢測OGD/R24 h模型中肌肽對星形膠質細胞存活率的影響。
　　6.海馬生物能量代謝儀檢測增加丙酮酸鈉濃度對肌肽下調星形膠質細胞的能量代謝的影響。
　　7.海馬生物能量代謝儀檢

4、測正常培養(yǎng)條件下原代皮層神經元/星形膠質細胞共培養(yǎng)體系，5 mM肌肽處理2h及24h后，共培養(yǎng)細胞能量代謝的變化。
　　8.海馬生物能量代謝儀檢測OGD/R0 h，OGD/R2 h模型中肌肽處理對共培養(yǎng)細胞能量代謝的調節(jié)。
　　9.Hoechst33342和PI核雙染法鑒定肌肽能否減少共培養(yǎng)體系OGD/R損傷所引起的神經元死亡。
　　10.熒光定量PCR檢測缺糖缺氧再灌注條件下肌肽處理后共培養(yǎng)體系MCT1、MCT2、M

5、CT4的表達。
　　結果：
　　1.在生理條件下，星形膠質細胞的基礎氧耗率(Basal OCR)和基礎胞外酸化率(Basal ECAR)分別為21.72±1.59 pmole/min/μg protein和3.95±0.28mpH/min/μg protein。其中線粒體呼吸占細胞呼吸總量的80％，并且線粒體呼吸中有85％用來合成ATP。
　　2.肌肽能顯著下調星形膠質細胞的Basal OCR和Basal ECAR，以

6、及與ATP產生有關的氧耗值，但同時它也能顯著增加星形膠質細胞的儲備呼吸。
　　3.肌肽處理顯著下調星形膠質細胞胞內ATP水平，由正常對照組的100％降低到42％。
　　4.在缺糖缺氧條件下，肌肽可以上調星形膠質細胞線粒體呼吸以及胞內ATP含量。
　　5.在缺糖缺氧條件下，肌肽對星形膠質細胞的存活率并無影響。
　　6.增加測試液內丙酮酸濃度并不能逆轉肌肽對星形膠質細胞能量代謝的抑制作用。
　　7.肌肽下調正常

7、培養(yǎng)條件下原代皮層神經元/星形膠質細胞共培養(yǎng)體系能量代謝。
　　8.在缺糖缺氧條件下，肌肽可以顯著上調共培養(yǎng)體系線粒體氧化磷酸化水平。
　　9.Hoechst及PI雙染結果顯示肌肽降低原代皮層神經元/星形膠質細胞缺糖缺氧再灌注損傷引起的神經元死亡。
　　10.熒光定量PCR的結果顯示缺糖缺氧條件肌肽能下調MCT1的表達。
　　結論：
　　1.肌肽具有調節(jié)星形膠質細胞及共培養(yǎng)體系細胞能量代謝的作用;