豬骨髓極小胚胎樣干細胞的優(yōu)化分選及生物學特性鑒定.pdf

1、目的:
　　聯合采用免疫磁珠及流式細胞術分選豬骨髓極小胚胎樣干細胞(VSELs);鑒定其生物學特性，并探尋體外培養(yǎng)、擴增豬骨髓VSELs的方法。
　　方法:
　　常規(guī)消毒、麻醉后穿刺豬髂后上棘獲取骨髓，使用紅細胞裂解法獲得豬骨髓單個核細胞，運用分別耦合了CD133和Lin抗體的磁珠進行免疫磁珠分選，對所得的CD133+細胞群和Lin-細胞群標記熒光抗體CD133、CD45及Lin，進一步通過流式細胞術分選獲得VSELs

2、，使用統(tǒng)計學方法分析兩種分選方法的效率，并探討聯合分選的價值;使用光學顯微鏡及透射電鏡觀察豬骨髓VSELs的形態(tài)特征和超微結構，運用堿性磷酸酶染色和免疫熒光染色的方法鑒定其多能干細胞標志的表達;同時采用條件培養(yǎng)基對豬骨髓VSELs進行培養(yǎng)擴增，觀察VSELs的貼壁及增殖情況。
　　結果:
　　聯合采用免疫磁珠與流式細胞分選術能夠高效的分選出豬骨髓VSELs，且使用CD133陽性分選較Lin陰性分選效率更高，但聯合分選有費用高

3、昂、細胞容易污染等缺點;豬骨髓VSELs約占總單個核細胞數量的0.01％-0.03％，該細胞體積較小、形態(tài)均一，呈二倍體核型、核大而細胞質少、核質比高，能夠表達多能抗原標志Oct-4、Nanog和Sox2，同時堿性磷酸酶染色陽性;VSELs經條件培養(yǎng)基培養(yǎng)后3-4小時可見細胞貼壁，培養(yǎng)2-3周仍無明顯增殖。
　　結論:
　　免疫磁珠及流式細胞術能夠快速的從豬骨髓中分選出數量較多、純度較高的VSELs;該細胞能表達胚胎樣干細胞