α-硫辛酸對硫酸吲哚酚致臍靜脈內(nèi)皮細胞氧化損傷的影響.pdf

1、目的:慢性腎臟疾病(chronic kidney disease，CKD)患者尤其是終末期腎衰患者的心血管發(fā)病率和死亡率遠高于普通人群。加速性動脈粥樣硬化是尿毒癥患者心血管并發(fā)癥的主要病理機制之一，起始于血管內(nèi)皮細胞損傷。CKD患者隨著腎小球濾過率降低，腎毒性物質(zhì)在體內(nèi)蓄積，可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，促進動脈血管產(chǎn)生粥樣硬化病變。硫酸吲哚酚(indoxylsulfate，IS)即是其中一種代表性的蛋白結(jié)合毒素，誘發(fā)氧化應(yīng)激使心血管系統(tǒng)受損并加

2、速慢性腎臟病進程。α-硫辛酸(α-lipoic acid，LA)是天然存在的最強抗氧化劑，目前在糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、缺血再灌注損傷等疾病的防治方面應(yīng)用較廣泛，而在CKD患者應(yīng)用較少。本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)為對象，探討α-硫辛酸能否對硫酸吲哚酚致血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的氧化損傷起到保護作用及其可能的作用機制，為α-硫辛酸在慢性腎臟病中應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

3、
　　方法:培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，將其分成對照組（CONTROL組），α-硫辛酸組（LA組），硫酸吲哚酚組（IS組）和硫酸吲哚酚+α-硫辛酸組(IS+LA組)。用MTS法檢測細胞存活率;硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)的含量;用流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)活性氧自由基(reactiveoxygen species，ROS)的變化;應(yīng)用RT-PCR法測定NADPH氧化酶4(NOX4) mRNA的表達。
　　統(tǒng)計學處理采用GraphP

4、ad Prism5軟件，實驗數(shù)據(jù)中計量資料用均數(shù)±標準差表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），均數(shù)兩兩比較采用Bonferroni法檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。各組實驗至少重復(fù)3次。
　　結(jié)果:
　　1、IS呈濃度（100、200、500μm/L）依賴性的降低細胞存活率，大于等于200μm/L時與對照組相比具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001);而LA呈濃度(20、50、100、250、500μm/L)依賴性

5、的提高細胞存活率，大于等于250μm/L時與對照組有顯著性差異(P＜0.01);250μm/L LA預(yù)處理細胞再與500μm/L IS共培養(yǎng)，與IS組（500μm/L）相比，細胞存活率顯著提高(P＜0.01)。選定500μm/L和250μm/L分別作為IS和LA繼續(xù)實驗濃度。
　　2、與對照組（1.29±0.40nmol/ml）相比，IS組（2.87±0.66nmol/ml）細胞MDA含量升高(P＜0.001);細胞經(jīng)LA預(yù)處理，

6、IS+LA組（2.04±0.46nmol/ml）較IS組（2.87±0.66nmol/ml）MDA含量降低(P＜0.05)。
　　3、與對照組(62.07±1.60％)相比，IS組(76.17±2.26％)ROS陽性細胞率增加(P＜0.001）;細胞經(jīng)LA預(yù)處理，IS+LA組(69.70±3.01％)較IS組(76.17±2.26％)ROS陽性細胞率降低(P＜0.05)。
　　4、與對照組（1.00±0.24）相比，IS組（